非蛋白编码RNA-UCA1在卵巢癌细胞顺铂耐药中的作用及机制研究

卵巢癌是妇科死亡率最高的恶性肿瘤，铂类药物耐药是导致化疗失败、肿瘤复发的主要原因。UCA1 RNA是我们应用RACE技术获得的非编码RNA，前期研究结果表明UCA1在卵巢癌组织中差异表达。外源性表达UCA1使肿瘤细胞对顺铂耐药性增加，同时使SRPK1基因转录明显下调。本课题通过实时定量PCR、免疫印记技术检测UCA1及SRPK1在卵巢癌组织中的表达特点及相互关系。通过基因转染、RNA干扰、免疫组织化学、免疫印记、MTT、增殖及侵袭、迁移实验、凋亡及凋亡相关因子检测，确定UCA1表达引起卵巢癌细胞顺铂耐药与SRPK1之间的相互作用关系及对细胞凋亡的影响，为探讨卵巢肿瘤发生铂类药物耐药机制提供新的思路，为临床合理选用化疗方案提供理论依据，为逆转卵巢癌铂类药物耐药提供新的分子靶点。

研究背景：卵巢癌死亡率居妇科肿瘤首位，而卵巢癌细胞对铂类药物耐药是导致化疗失败，肿瘤复发的主要原因。研究发现SRPK1及凋亡相关因子与卵巢癌细胞顺铂耐药密切相关。近年来ncRNA表达异常与恶性肿瘤发生发展的相关性日益受到重视，而ncRNA在肿瘤细胞化疗耐药中的作用研究甚少。UCA1 RNA是我们应用RACE技术获得的ncRNA，前期研究结果表明外源性表达UCA1使肿瘤细胞对顺铂耐药性增加。本课题通过检测UCA1及SRPK1在卵巢癌组织中的表达特点及相互关系。通过基因转染、RNA干扰、MTT、增殖及侵袭、迁移实验、凋亡及凋亡相关因子检测，确定UCA1表达引起卵巢癌细胞顺铂耐药与SRPK1之间的相互作用关系及对细胞凋亡的影响，为探讨卵巢癌发生铂类药物耐药机制提供新的思路。.　　研究的目的及主要内容：通过检测UCA1 RNA 及SRPK1 mRNA在卵巢癌组织中的表达，明确UCA1及SRPK1与卵巢癌之间的关系。通过观察外源性表达UCA1 RNA及应用RNAi技术下调SRPK1基因在卵巢癌细胞的表达对顺铂耐药、增殖、侵袭、凋亡及凋亡相关通路分子的影响，明确UCA1是否通过调控SRPK1的表达，进而改变细胞凋亡通路分子使卵巢癌细胞对顺铂的耐药性发生改变。. 研究的结果及意义：通过RT-PCR方法检测UCA1及SRPK1在卵巢癌及正常卵巢组织中的表达，表明UCA1及SRPK1在卵巢癌组织中表达，在正常卵巢组织中不表达。外源性表达UCA1 RNA增加卵巢癌细胞系SKOV3的恶性表型及顺铂耐药，同时引起SRPK1及Bcl-2蛋白表达上调、BAX蛋白表达下调。应用RNAi技术下调SKOV3细胞中的SRPK1蛋白表达，引起SKOV3细胞对顺铂耐药性降低，凋亡增加，Bcl-2蛋白质表达下调，BAX蛋白质表达上调。表明UCA1 RNA通过上调SRPK1的表达，引起卵巢癌细胞SKOV3凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达发生变化，从而引起SKOV3对顺铂耐药性增加。. 以上研究表明在卵巢癌组织中UCA1和SRPK1高表达；在卵巢癌细胞SKOV3中，ncRNA UCA1通过上调SRPK1的表达，引起细胞凋亡相关基因发生改变，使细胞凋亡下降，促进细胞发生顺铂耐药；结果表明UCA1引起SRPK1表达改变和卵巢癌耐药相关，这为临床上逆转卵巢癌细胞顺铂耐药提供了一定的理论依据。