卵巢癌顺铂耐药相关长片段非编码RNA研究

Background: Currently, there is a growing number of long noncoding RNAs(lncRNAs) associated with DNA damage response and cancer cell drug resistance. However, the involvement of lncRNA in ovarian cancer cell platinum resistance has not yet been reported. Through lab research a cisplatin resistant cell line of ovarian cancer has been established from which potential lncRNAs were selected using transcriptome sequencing. ..Question: What is the relationship between the selected lncRNAs and cisplatin resistance？ ..Contents:（1）Bioinformatics will been used to reduce the scope of lncRNAs.(2)We will narrow the range of lncRNAs by checking the expression difference in cell lines and cancer tissues.（3）LncRNAs will be cloned, sequenced and analysed. (4)We will investigate the relationship between lncRNAs and cisplatin resistance using overexpression or RNA knock-down technology. (5)LncRNA associated proteins will been discovered using RNA pull-down and mass spectrometry methods. ..Results and significance: One or two cisplatin resistant lncRNAs will been identified after finishing the project. This will contribute to a thorough understanding of the molecular mechanism of platinum resistance in ovarian cancer.

背景：研究发现一些长片段非编码RNAs（lncRNAs）参与了肿瘤细胞对DNA损伤时的应答和肿瘤耐药机制。但关于lncRNAs与铂类耐药相关的研究鲜有报道。目前，我们已建立卵巢癌顺铂耐药细胞株，并已通过转录组测序（不包括核糖体RNA和小片段RNA的全转录组）获得了候选lncRNAs。 问题：哪些候选lncRNAs与卵巢癌顺铂耐药有关？ 主要研究内容：1）利用生物信息学方法进一步缩小候选lncRNAs数量；2）利用耐药细胞株和卵巢癌组织验证候选lncRNAs的表达差异情况；3）候选lncRNAs克隆测序和生物信息学分析；4）过表达或RNA干扰技术研究候选lncRNAs与顺铂耐药关系，并初步研究其相互作用蛋白。预期结果和意义：本项目的完成将发现1-2个与卵巢癌顺铂耐药相关的lncRNAs。为深入研究lncRNAs参与卵巢癌铂类耐药分子机制奠定基础，同时也为解决临床耐药问题提供理论基础。

原发和继发性耐药是浆液性卵巢癌化疗急需解决的问题。研究发现一些长片段非编码RNAs（lincRNAs）参与了肿瘤细胞对DNA损伤时的应答和肿瘤耐药机制。但关于lincRNAs如何参与卵巢癌铂类耐药的分子机制尚不清楚。. 通过对自主建立的顺铂耐药细胞株转录组测序获得了候选lincRNAs。利用生物信息学方法进一步缩小候选lincRNAs数量，同时利用敏感和耐药细胞株及卵巢癌组织验证候选lincRNAs的表达差异情况，综合RNA干扰、蛋白质组学和RNA-pull down等技术研究候选lincRNAs参与顺铂耐药的分子机制。. 通过研究发现lin-RECK-3, H19, LUCAT1, LINC00961和linc-CARS2-2等lincRNAs在耐药细胞株中高表达，Linc-TNFRSF19-1和LINC00515等lincRNAs在耐药细胞株中低表达。与正常卵巢上皮组织相比，H19在浆液性卵巢癌中高表达，另外H19高表达的患者容易复发。通过细胞和裸鼠实验证实耐药细胞株H19干扰后增加了对顺铂的敏感性。通过非标记定量蛋白质组学发现6个参与谷胱甘肽代谢的蛋白在H19干扰后表达量降低。进一步发现H19干扰后增加了对双氧水的敏感性，同时细胞内谷胱甘肽水平也明显降低，提示H19可能通过调节谷胱甘肽途径参与顺铂耐药机制。通过本项目研究，为我们理解lincRNAs参与卵巢癌铂类耐药分子机制提供实验基础，同时也为解决临床耐药问题提供思路。