MicroRNA在NK细胞介导的HIV/HCV 共感染者肝纤维化进展中的作用及机制研究

HIV can increase the liver injury in patients of HCV infection, but the mechanism has not yet been elucidated. NK cells as the largest number of immune cells in the liver may be involved in the occurrence of liver damage.The purpose of this program is to explore the frequency and function changes of NK cells in patients of HIV/HCV co-infection compared with the patients of HCV, HIV infection and healthy volunteers. We will detect the NK cell frequency, clustering, and surface activative or inhibitory receptors and TNF related apoptosis induced ligand (TRAIL) expression in peripheral blood and liver tissue by the methods of flow cytometry, western blot, immunohistochemistry. Then study the correlation between NK cell and liver injury of HIV/HCV co-infection. MiRNAs are a novel class of small non-coding single-stranded RNAs that regulate gene expression at the posttranscriptional level by binding to target mRNAs. MiRNAs in the complex regulatory network controls both viral and host gene expression in the infected cells. MiRNA chip was used to perform a comprehensive analysis of miRNA expression from four groups. Differentially expressed miRNA lists were investigated for cognate mRNA targets in order to delineate miRNA-mRNA functional interactions. Taken together, our project will provide the first reported mechanistic data on effect of miRNA on the hepatic fibrosis mediated by NK cell and appear a strategy to slow or block hepatic fibrosis in HIV/HCV con-infected patients.

HIV/HCV共感染者的肝纤维化进展迅速，其机制尚未完全阐明。NK细胞是肝脏内数量最多的免疫细胞，参与肝损伤的发生。本课题拟以HIV/HCV共感染、单纯HCV、单纯HIV感染者以及健康志愿者作为对照，在HIV/HCV 共感染者中采用流式细胞术、免疫组化等方法检测外周血和肝组织中NK细胞频率、分群及表面活化/抑制性受体表达、TRAIL以及相关炎症因子的表达情况。探索不同感染组NK细胞频率变化以及功能差异，研究NK细胞在HIV/HCV共感染者肝损伤加重中的作用，以及NK细胞功能差异与肝损伤程度的相关性。同时使用MiRNA芯片检测各组患者NK细胞表达MiRNA的差异，筛选出各组差异表达的MiRNA。进一步采用过表达及干涉表达的方法考察相关MiRNA在NK细胞促进HIV/HCV共感染肝纤维化快速进展中的作用及机制。从而从MiRNA-NK细胞的角度研究共感染着肝纤维化快速进展的机制。

HIV/HCV共感染会加速肝纤维化的进展，并且成为高效抗逆转录治疗时代艾滋病的主要死亡原因之一。但是HIV/HCV共感染中肝纤维化加速进展的机制尚未完全阐明。其中自然杀伤细胞（natural killer cells, NK cells）作为肝脏内最多的免疫细胞，在肝纤维化发生发展中发挥重要作用。于前期的研究，我们发现表皮形态细胞生素（Epimorphin）可以影响HIV/HCV共感染纤维化的进展，因此我们在本基金的资助下主要做了如下研究：通过检测HIV/HCV共感染患者外周血NK细胞Siglec-7+CD56dim数量和功能的改变，分析其数量与Fas/CD95凋亡受体表达的相关性，发现Siglec-7+CD56dim 亚群数量在HIV/HCV共感染中出现明显下降，且本群细胞分泌IFN-γ的功能也明显受损，但Siglec-7+CD56dimNK细胞表达Fas/CD95水平升高，且该群数量的下降与Fas/CD95凋亡受体的表达呈负相关；同时我们体外检测了HIV/HCV共感染表皮形态发生素（Epimorphin, EPM）的表达，发现HIV/HCV共感染可以上调肝星状细胞（hepatic stellate cells, HSC）EPM表达，从而上调了HSC的增殖、侵袭能力及合成胞外基质的能力，加速肝纤维化的进展，通过进一步研究，发现这种作用是通过ERK信号途径上调TIMP来实现的。除此之外，我们还检测了HIV/AIDS患者浅表淋巴结中精氨酸酶Ⅰ（ArgⅠ）和诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）的表达，分析其与CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、HIV病毒载量的相关性。我们发现AIDS患者的淋巴结中ArgⅠ的表达较正常人明显升高，淋巴结、外周血CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞计数与ArgⅠ与iNOS表达皆具有相关性。本项目从NK细胞、表皮形态发生素、精氨酸酶Ⅰ的角度研究了HIV/HCV共感染中肝纤维化的发生机制，为揭示HIV/HCV共感染的病理机制提供一定实验基础。