Kruppel样因子15在慢性肾脏病肾纤维化中的作用及机制

肾纤维化是慢性肾脏病（CKD）发展至终末期肾病的共同途径和主要病理结果，发病机制尚未阐明。Kruppel样因子15(Kruppel-like Factor15,KLF15）是一种核转录因子，参与调节细胞分化、增殖、凋亡等生物学过程。本项目组前期实验发现，在5/6肾切除大鼠模型中，KLF15表达显著下降，而细胞实验KLF15过表达时可减少细胞外基质产生，提示KLF15可能与肾纤维化发生相关。本课题拟在前期研究的基础上，采用KLF15基因敲除小鼠和野生型小鼠行单侧肾切除构建CKD模型，体内研究KLF15在肾纤维化中的作用；体外研究KLF15过表达对TGF-β1刺激系膜细胞和成纤维细胞产生细胞外基质的影响，并通过pull-down、电泳迁移率变动分析等方法探讨KLF15的作用机制。本研究对阐明CKD肾纤维化的发病机制具有重要意义，并为寻找抗肾纤维化治疗方法提供新的思路和实验依据。

研究背景和方向：肾纤维化是慢性肾脏病（CKD）的重要病理表现。Kruppel样因子15（KLF15）是重要核转录因子，参与细胞分化、增殖、凋亡等生物学过程。本研究旨在探讨KLF15在肾纤维化中的作用及机制，以期从一个新的角度阐明CKD发病机制。.主要内容：1、动物实验：（1）建立5/6肾切除大鼠肾纤维化模型，分别在12周和24周处死大鼠，留取肾组织进行病理染色和KLF15免疫荧光检测，并提取肾组织总RNA，进行Realtime PCR检测KLF15的表达。（2）血管紧张素II（Ang II）刺激建立肾纤维化小鼠模型，分为对照组，血管紧张素II组，血管紧张素II+氯沙坦钾组，观察尿MA/Cr、肾功能，留取肾组织进行病理染色和KLF15免疫荧光检测，通过Realtime PCR和Western Blot法检测肾脏纤维化指标和KLF15表达变化。2、细胞实验：用TGF-β1刺激大鼠间质成纤维细胞（NRK-49F），运用细胞转染等方法研究KLF15过表达对CTGF和细胞外基质mRNA及蛋白表达水平的影响。 Realtime PCR和Western blot方法观察加用MAPK通路（p38/MAPK, ERK/MAPK 和JNK/MAPK）阻断剂是否可影响KLF15的表达水平。CoIP方法检测共激动因子P/CAF蛋白和KLF15蛋白是否结合，ChIP方法检测P/CAF蛋白是否与下游纤维化因子CTGF的启动子位点结合。.重要结果和关键数据：1、随着5/6肾切除大鼠肾纤维化程度的加重，肾间质中KLF15表达水平逐渐下降。2、Ang II刺激小鼠肾纤维化模型KLF15表达明显下降。AT1受体拮抗剂氯沙坦干预，KLF15表达恢复。3、在NRK-49F 细胞中，KLF15过表达可抑制TGF-β1介导的CTGF和细胞外基质mRNA和蛋白表达水平。4、TGF-β1介导的MAPK通路激活减少KLF15表达，其中ERK/MAPK和JNK/MAPK通路阻断剂可呈浓度依赖性增加KLF15的mRNA和蛋白表达水平。5、P/CAF蛋白与KLF15蛋白竞争性直接结合，KLF15抑制P/CAF蛋白与下游纤维化因子CTGF启动子位点结合。.科学意义：本研究证实KLF15在肾间质纤维化病变过程起重要作用，并初步阐明了其作用的信号通路，为进一步探讨CKD 发病机制及寻求有效治疗方法提供新的思路和实验依据。