过表达IL-17RLM羊水间充质干细胞靶向调控IL-23/Th17轴对克罗恩病的治疗作用及机制

Crohn's disease (CD) is one of the inflammatory bowel disease with unknown pathogenesis but definitive relationship with autoimmune disorders.The effects of conventional treatments are limited and hard to maintain. The newly two promising therapies both have their own disadvantages,such as poor immunoregulation specificity for stem cell therapy and non-sustainable effect for targeted therapy. Amniotic fluid-derived mesenchymal stem cells(AF-MSCs) have been proved to be with both the characteristics of embryonic stem cell and adult stem cell in our previous study and could be well-chosen as ideal seeding cells for stem cell therapy for CD.Recent studies identified that IL-23/Th17 axis was the key signaling pathway of CD immune disorders.IL-17,the effector molecule of IL-23/Th17 axis，has been defined as a suitable target of immuno-targeted therapy for CD. We intend to establish a stably over expressing IL-17RLM stem cell line via interleukin-17 receptor like molecule(IL-17RLM）modified AF-MSCs by means of lentivirus vector, effectively and sustainedly down-regulate IL-17. We expect to complement these two new remedies by recombinant stem cells and provide a new prospective way to treat CD.

克罗恩病（Crohn's disease, CD）是机体免疫紊乱导致的肠道炎性疾病，发病机制未明，传统疗法效果欠佳，预后差。两种新的疗法效果显著但有诸多不足，如干细胞治疗取材难、免疫调节特异性差；靶向治疗不能持续起效，难以维持。人羊水间充质干细胞（amniotic fluid-derived mesenchymal stem cells, AF-MSCs）同时具有胚胎来源及成体来源干细胞特性，是优秀的种子细胞。新近研究发现IL-23/Th17轴是CD免疫紊乱的关键信号通路，IL-17是IL-23/Th17轴的效应分子，是靶向治疗的合适靶点。我们拟采用慢病毒载体将IL-17受体融合蛋白（IL-17RLM）基因转入hAF-MSCs，建立稳定的过表达IL-17RLM 的AF-MSCs细胞系，调控IL-17表达，互补靶向与干细胞治疗优势，研究其对IL-23/Th17信号轴的调控及对CD的治疗机制。

克罗恩病（Crohn's disease, CD）是机体免疫紊乱导致的肠道炎性疾病，发病机制未明，传统疗法效果欠佳，两种新的疗法效果显著但有诸多不足，如干细胞治疗取材难、免疫调节特异性差；靶向治疗不能持续起效，难以维持。本研究采用慢病毒载体将IL-17受体融合蛋白（IL-17RLM）基因转入人羊水间充质干细胞（amniotic fluid-derived mesenchymal stem cells, AF-MSCs），建立稳定的过表达IL-17RLM 的AF-MSCs细胞系，调控IL-17表达，互补靶向与干细胞治疗优势，研究其对IL-23/Th17信号轴的调控及对CD的治疗机制。. 项目自立项以来按照计划顺利进行。首先，通过慢病毒载体成功构建了稳定的、活性高及具备干细胞特征的IL-17RLM-AF-MSCs（同时完成人脐带来源MSCs）细胞株。体外共培养实验发现IL-17RLM-MSCs对TNBS 诱导的结肠炎小鼠脾脏淋巴细胞具有免疫调节作用，表现为抑制淋巴细胞增殖，调节Th1/Th17/Treg平衡，且其抑制IL-23/Th17轴的作用强于未修饰MSCs，相关研究成果已发表。同时，采用TNBS诱导的小鼠急性结肠炎模型进行体内实验，发现移植17RLM-MSCs后小鼠结肠炎症状、大体评分、组织学及免疫平衡均明显改善，尤其在组织学改善和对IL-23/Th17轴的抑制作用优于未修饰MSC，该部分已总结并投稿。. 结合新近临床研究，抑制IL-17在临床研究中疗效欠佳，结合本课题情况，我们推测可能于临床病例选择有关，IL-17可能在慢性化及纤维化过程中的作用更为明确，因此在原方案基础上进一步拓展，采用TNBS诱导的慢性结肠炎模型，通过评估修饰后的细胞对慢性炎症和纤维化的影响明确该细胞是否具有抗纤维化作用。同时在临床中筛选不同活动期、疾病类型及病程的患者血清及外周血淋巴细胞，并通过体外培养筛选合适治疗的人群，进一步实现个体化治疗，该部分增加内容正在进行中。. 通过以上研究，拟进一步理解CD的发病机制，实现干细胞治疗的临床转化及个体化治疗。