14-3-3蛋白调节Rho活性促进糖尿病猪冠状动脉雷帕霉素支架术后再狭窄机制的研究

糖尿病时冠脉雷帕霉素涂层支架术后支架内再狭窄（ISR）发生机制仍不明。我们对糖尿病猪ISR血管段组织行蛋白组学研究和生物信息学分析，发现ISR组织中Rho和14-3-3表达升高，作用增强。高表达14-3-3r的大鼠平滑肌细胞（rSMCs）高糖培养下增殖、迁移和重构加剧。结合文献推断，糖尿病时14-3-3对不同程度磷酸化RhoGAP和RhoGEF扣押抑制有改变，使Rho活性上调，导致ISR发病。后续将探讨高/低表达14-3-3的rSMCs及COS7和293T细胞在高/低糖和促/抑制RhoGAP和RhoGEF磷酸化条件下，Rho活性的改变，及14-3-3 扣押内/外源性RhoGAP和RhoGEF量的变化。在糖尿病支架模型冠脉内注射腺病毒R18干扰14-3-3与RhoGAP和RhoGEF结合，研究血管壁组织内Rho通路活性及ISR发生情况。阐明14-3-3调节Rho活性与糖尿病ISR发生的关系。

药物涂层支架广泛运用后，冠状动脉介入术后支架内再狭窄（in-stent restenosis, ISR）发生率已明显降低，但在糖尿病时ISR发生率仍显著高于非糖尿病时。为研究糖尿病和非糖尿病时ISR发生机制，前期研究中我们建立糖尿病和非糖尿病小型猪冠状动脉雷帕霉素支架术后ISR模型。对ISR组织的分泌蛋白组学研究和生物信息学分析发现并证实，14-3-3调控蛋白家族和细胞骨架调控蛋白系统表达增强，与再狭窄有关，其中家族成员14-3-3beta、14-3-3zeta、14-3-3epsilon和14-3-3gamma表达明显上调。在人血管平滑肌细胞（HASMCs）中高表达上述14-3-3成员后，发现14-3-3beta和14-3-3zeta显著促进细胞增殖。在低糖和高糖培养条件下，14-3-3beta均促进HASMCs增殖、迁移，高糖加剧这一作用。另外，14-3-3beta水平升高与促进细胞增殖（SM22、MYH11、COL1A1和COL1A3）、促炎症反应（OPN、S100A4和IL-1）和促迁移蛋白（MMP-2、MMP-3和MMP-9）水平上调有关。体内实验中，在糖尿病和非糖尿病C57BL/6小鼠髂股动脉短暂阻断血流后注入14-3-3beta腺病毒，并钢丝进行内膜损伤实验。1个月后，处死模型。对实验血管进行病理和分子实验，初步实验结果显示14-3-3beta高表达加重血管内膜增生，糖尿病时此效应更明显。目前，已发表相关SCI论著2篇。（PLoS One. 2013;8:e83853.共同第一作者）（Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2013;33:572-80第一作者）。与沈阳军区总院心内科一起获得国家科技进步奖二等奖。