基于核酸适体和分子信标的有机磷农药快速筛查方法研究

The molecular biology technique is the new trend on the deleterious substance detection in food safty testing field,and aptamer technology is one of the focuses..A new method of screening aptamer without target molecules immobilized will be established, which can select aptamers against several targets molecule simultaneously. This method will be applied to the selection of aptamers binding to organophosphate pesticides in primary products. Molecular beacons will be designed based on the second structures and binding sites of the selected aptamers, which are partly complementary with the middle constant nucleotide sequence of the aptamers. A competitive inhibition method was developed and applied to screening of organophosphate based on aptsmers and molecular beacons. The new method will be potential in detection of organophpsphate pesticides owing to its excellent characteristics such as high sensitivity, strong identification, and simple operation.

利用分子生物学技术检测食品中的有害污染物是食品安全检测领域的新趋势，核酸适体检测技术是其中的热点。本项目针对农产品中重点监控的有机磷农药，利用非固相化的适体筛选方法同时针对多个有机磷农药靶分子进行核酸适体筛选。根据筛选到适体的二级结构及相应的结合位点，设计、合成分子信标；利用分子信标和有机磷农药竞争结合适体的原理建立竞争抑制法，快速筛查有机磷农药。该方法将核酸适体和分子信标技术有机结合，具有灵敏度高、识别性强、操作简单，不必与未反应的探针分离即可实时检测的优点，检测更方便、更快捷，将为有机磷农药的快速筛查开辟新的途径。

利用分子生物学技术检测食品中的有害污染物是食品安全检测领域的新趋势，核酸适体检测技术是其中的热点。按照课题的研究计划，构建了非固相化的核酸适体筛选方法，筛选了10种有机磷农药的核酸适体，建立了基于核酸适体及分子信标的有机磷农药检测方法。.利用非固相化的核酸适体筛选方法针对甲拌磷、丙溴磷、水胺硫磷、氧化乐果、甲基对硫磷、马拉硫磷、辛硫磷、乐果、久效磷、草甘膦进行了核酸适体的筛选，采用荧光法、洗脱法等对筛选到的ssDNA进行了活性鉴定。最终筛选到针对甲拌磷、丙溴磷、水胺硫磷、氧化乐果的广谱性核酸适体2条，改造获得针对丙溴磷、水胺硫磷的核酸适体1条，针对甲基对硫磷、马拉硫磷、辛硫磷、乐果的特异性核酸适体各1条，针对久效磷和草甘膦的核酸适体各3条。.对适体在丙溴磷、水胺硫磷、马拉硫磷在检测中的应用进行了深入的研究，建立了基于核酸适体及分子信标的丙溴磷、水胺硫磷、马拉硫磷的荧光检测方法，并对建立的方法进行了评价。对核酸适体在久效磷、草甘膦检测中的应用进行了初步的探索研究。建立的检测方法能够实现对实际样品中丙溴磷、水胺硫磷、马拉硫磷、草甘膦的快速筛查，为有机磷农药的检测开辟了新的途径。.通过本项目的实施，公开发表（含录用）相关学术论文8篇，其中SCI论文1篇，核心期刊5篇，一般国家级论文2篇；申报国家发明专利2项；项目主持人获批省级高校优秀人才支持计划重点项目1项，被培养遴选为校级重点学科带头人，培养硕士研究生1名，青年教师1名；参加学术会议1次。更多的研究成果将在今后予以整理和发表。.总体上，本课题已经完成了计划任务，达成了计划研究目标。