抽搐相关基因在小鼠小脑发育以及小脑相关疾病中的作用

本课题拟在小鼠成体、体外培养小脑切片以及原代培养的神经细胞水平，利用转基因技术和RNA干扰技术将小鼠抽搐相关基因（SEZ-6）沉默；利用RT-PCR、Western杂交、免疫组化研究SEZ-6基因、蛋白激酶C在神经元、脑组织中表达改变。利用膜片钳技术、激光共聚焦显微镜研究SEZ-6基因沉默后,细胞膜电位的改变和Ca2+、Na+浓度的变化，以及蒲肯野细胞凋亡等，探讨SEZ-6基因功能丧失与神经细胞形态和功能的改变之间的关系。同时将构建的RNA干扰质粒注射到新生小鼠第四脑室，观察RNA干扰后小鼠小脑结构有否异常，蒲肯野细胞发育状态，以及小鼠是否出现步态不稳、抽搐、眼颤等癫痫和共济失调等体征。研究小鼠SEZ-6基因沉默对小鼠小脑发育的影响；目的在于探讨SEZ-6基因在浦肯野细胞发育中的作用，以及SEZ-6基因功能丧失与癫痫或小脑共济失调发病之间的关系，探讨癫痫和小脑共济失调发病的新机制。