基于护场理论探讨箍围法促进疮疡炎症消退的介质及作用机制

The theory of "Huchang" is one of the most important theories in surgery of chinese medicine. The past clinical practice and initial research had confirmed, the forming of "Huchang" around the ulcer and sore can control the spread of infection and promoter the extinction of inflammation. On this basis, we investigate it deeply base on the new knowledge of the theory of "Huchang". This research take the yang syndrome of sore for example to investigate the the effector substance and molecular mechanism that the method of hoop circumference constraints the spread of infection of sores, using the technique and method of molecular biology, immunochemistry enzyme immunoassay and so on. Using the rat to make the yang syndrome of sore model through staphylococcus aureus. Monitor the dynamic change and related indicators of the anti-inflammatory properties and promote infection subsided media：lipoxin ,resolvin, high mobility group box1,bactericidal/permeability increasing protin, IL-10、TGF-β1、TNF-α, MMPS、NO、PCT, neutrophils, macrophages, etc. .Through analysis dynamic variation of the tissue substances surrounding at different time points and different regional the inflammatory lesions, to investigate the mechanism of Guwei treatment controlling the spread of infection and promoter the extinction of inflammation.Guided by theories of "Huchang", the research may provide theoretical foundation and scientific basis for the clinical application of the method and drugs of hoop circumference.

"护场"是中医外科学中的重要理论。在既往临床实践中发现，疮疡周围护场的形成可以有效控制感染和促进炎症消退。在此基础上，对"护场"进一步深入研究。本课题以阳证疮疡为例，在"护场"理论指导下，通过建立大鼠疮疡炎症模型，采用箍围法中药外用，运用分子生物学、免疫化学、酶免等技术和方法，监测具有抗炎性质和促感染消退介质的动态变化及相关指标：脂氧素、消退素、细菌透性增加蛋白、高迁移率族蛋白-B1、抗炎细胞因子（IL-10、TGF-β1、TNF-α）、基质金属蛋白酶MMPS、NO、降钙素原、嗜中性粒细胞、巨噬细胞等，通过分析疮疡感染炎症病灶周围组织中不同时间点和不同区域效应物质动态变化规律，研究箍围法在控制疮疡感染和促进炎症消退中的作用机制，为护场理论和临床应用提供依据。

护场理论是中医外科体系中重要的理论。采用箍围法能促进疮疡护场形成，护场形成能约束感染的深陷和扩散，促进炎症消退，从而减少抗菌素的使用，甚至不用抗菌素。护场形成决定疮疡的预后，本研究通过皮下注射金黄色葡萄球菌1 mL（3-5×109 cfu/mL）造成皮下脓肿模型。监测大鼠精神状态、体重、皮肤温度、脓肿波及范围及形成时间，创面破溃及愈合时间，监测大鼠疮周经皮氧分压。通过观察护场形成前后ELISA法测定血浆内HMGB1、LXA4、BPIP、RvD1、IL-10、IL-1β的含量，PCR检测大鼠创周组织IL-10、IL-1β、TNF-α的含量，分泌物中MMP-2和NO的表达，HE染色、免疫组化测定疮周组织内相关因子的含量。研究显示：箍围药红肿消与百多邦相比都能起到控制感染、抑制炎症的左右。在肿疡期（第3 d）应用箍围法指导下的红肿消酊和百多邦处理大鼠皮肤脓肿未起到“消散毒邪”的作用，考虑与注射细菌量较大有关。阳证疮疡模型制造成功后，红肿消酊箍围消肿减轻局部炎症反应，改善大鼠体重及其精神状态，增加创周血供以抗感染、抗炎，进而促进护场形成（ 7.33±1.97天），百多邦组脓肿局限时间（9.28±1.38天）。红肿消酊感染早期应用可降低大鼠血浆降钙素原、CRP的含量，但并不能减轻局部感染，不能杀灭金黄色葡萄球菌，通过抑制炎症反应发挥作用。红肿消酊能够使皮肤脓肿尽早局限，并能缩短创面愈合。在肿疡期（3d）、溃疡期（14d、18d）应用箍围药红肿消不能促进大鼠血浆内IL-10的表达、抑制IL-1β的表达。肿疡期（3d）应用箍围药红肿消均可提高血浆内BPI、LXA4含量，参与早期炎症抑制作用。在脓疡期（7d）可促进大鼠血浆内RvDl、IL-10的表达、抑制IL-1β的表达，起到止痛、抗炎、抑制水肿等促肿胀消退、局限，促进护场形成。在溃疡期（14d、18d）创面愈合阶段通过提高血浆BPI、RvDl水平、抑制IL-1β的表达促进创面愈合。通过研究疮疡病灶感染炎症周围的相关介质及细胞因子的变化，初步明确箍围法中药促进护场形成、控制感染和促进炎症消退的治疗机制，为进一步提高临床疗效和临床推广应用提供了科学依据。但是，感染与炎症的机制是复杂的，存在多种信号通路，Toll样受体信号通路、NF-κb信号通路、炎症小等，需要结合本实验研究结果，下一步深入研究箍围药对信信号通路、炎症小体等的影响。