Cx43在心理应激引发心性猝死中的表达特征和法医学检测技术研究

Violence, disaster, medical process, accidents, drug, overwork, bound and psychological stress that often leads to ventricular heartbeat tachycardia, elevated blood pressure, coronary insufficiency and myocardial ischemia, cause of sudden cardiac death that is common in forensic pathology identification, especially with others is related to sudden cardiac death in forensic identification have a great effect on the case.Hence, It is significant to determine the specific pathological evidence about the sudden cardiac death caused by the psychological stress. CX43 is the main component of gap junction of ventricular cells and is a key protein in coordinatiing between electrical conductivity and movement of ventricular myocytes. Change of the CX43 expression and localization is mainly molecular basis that could result in molecular arrhythmia. For one thing,the purpose of our research is that reveals the relationship of CX43 transcription level and distribution change and dephosphorylation in sudden cardiac death caused by mental or non - mental factors.For another, prepare the antibodies to identify psychological sudden cardiac death and to establish of forensic technology standard.

暴力、灾害、医学过程、事故、药物、过劳、束缚等心理应激往往导致室性心动过速，血压升高，冠状动脉供血相对不足和心肌缺血，引发的心性猝死在法医病理鉴定中较常见，尤其是与他人行为相关的心性猝死的法医学鉴定对案例判决有非常大的影响。因此，关于心理应激引起的心性猝死的特异性的法医病理性学证据的确定具有重要意义。CX43是心室肌细胞间隙连接的主要成分，是协同心室肌细胞间电传导和运动的关键蛋白，室性心肌病中，CX43表达和定位改变是引起心率失常的主要分子基础，本研究的目的是要揭示心理性和非心理性心性猝死过程中CX43转录水平和分布改变与和去磷酸化的关系，并制备出能鉴别心理性心性猝死的抗体并建立法医鉴定技术标准。

经统计，在法医病理学死因鉴定的实际案例中，心源性猝死案例50%以上是在纠纷、灾害、事故、医疗过错、过劳、追赶、束缚等应激条件下所引起。尸检及组织病理学检查未能发现其他死因，结合其死亡经过又只能用心源性猝死来解释。此类猝死案例极易引发人们对死因的质疑和误解，尤其是与他人行为相关的心性猝死的法医学鉴定对案件判决有非常大的影响。因此，本课题研究目标为：复制心理应激下心性猝死的动物模型及筛选关键蛋白，找出与非心理性心性猝死的区别以及为以后制备出能鉴别心理性心性猝死的抗体并建立法医鉴定技术标准奠定一定的理论基础。.近年来研究显示，心肌缝隙连接蛋白与多种心脏疾病的发生有密切的关系,是心肌细胞维持电生理搏动的基础结构。因此，课题组利用生物信息学分析技术对人和小鼠缝隙连接蛋白中含量最为丰富的Cx43基因及其编码的蛋白序列进行生物信息学分析。研究发现，小鼠和人CX43蛋白序列的一致性高达99%，其拓扑学结构、抗原表位、磷酸化位点、包含磷酸化位点和位于膜外区域的线性表位完全一致。因此，完全可以利用小鼠Cx43蛋白来代替人Cx43蛋白进行相关的功能研究和建立相关的实验动物模型。在动物模型复制中，目前应激动物模型的制备无统一标准，结合法医病理检案中猝死案例的实际情况，在对比和借鉴多种应激模型的基础上实验选择多项刺激联合应运，即给予实验小鼠木棒激惹、悬吊和强迫游泳多项刺激，在动物模型的处死方法上，在采用断颈处死的同时，我们在每组中随机挑选一定数量的小鼠通过注射过量异丙肾上腺素来引发心源性猝死。结果均显示应激组和动脉粥样硬化组小鼠一样，心肌存早期缺血缺氧表现。提示小鼠应激模型建立成功。动物模型的成功建立，可以对后续CX43在猝死心肌中的表达研究提供必要前提条件，具有极其重要的意义。在此基础上，课题组完成应激与早期动脉粥样硬化Cx43的表达分布及磷酸化研究，获得的磷酸化蛋白，本次实验研究表明Cx43的数量、空间分布及其功能状态的改变可以视为心律失常发生的分子解剖学基础，其磷酸化水平及表达分布异常可反映出心电活动的异常；Cx43相关的一些指标对诊断和解释某些猝死（如应激情况下，无或者仅有轻度冠心病的猝死案例）具有重要的参考意义。