脊髓代谢型谷氨酸5受体参与吗啡耐受的信号机制研究

临床疼痛诊疗中，耐受的发生常阻碍吗啡在临床上的继续使用，近年来国内外研究报道代谢型谷氨酸受体5（mGluR5）参与吗啡耐受的过程，mGluR5在耐受中被大量激活，促进吗啡耐受的发展，但该受体参与吗啡耐受的作用机制尚未见报道。本研究从mGluR5受体出发，干预其在脊髓的表达，探讨其在吗啡耐受中的作用及其机制，此外并对磷脂酶C（PLC）、蛋白激酶C（PKC）和G蛋白各亚型磷酸化在吗啡耐受过程中的转化情况进行测定，以此验证mGluR5受体是否通过PLC/PKC信号级联调节通道发挥对吗啡耐受的影响及mGluR5受体激活后所致PKC激活对G蛋白磷酸化及吗啡耐受的促发作用。本研究希望通过针对性的对吗啡耐受中mGluR5的研究，观察PLC及PKC在耐受中的活性变化，进而检测其对G蛋白磷酸化的影响，来探讨各靶点在吗啡耐受中的作用，以期能阐述脊髓mGluR5参与吗啡耐受的信号机制。

背景：探讨脊髓代谢型谷氨酸5受体参与鞘内吗啡耐受的信号机制，明确PKC及PLC相关亚型在mGluR5影响吗啡耐受信号通路上的作用，同时观察鞘内吗啡耐受对大鼠脊髓G蛋白相关亚型表达的影响。.主要内容：（1）大鼠给予鞘内mGluR5反义寡聚核甘酸(ODN)处理，经行为学试验评价鞘内mGluR5 ODN处理对吗啡耐受的影响；（2）观察鞘内吗啡耐受对大鼠脊髓PKC表达的影响，及鞘内mGluR5 ODN处理对吗啡耐受所致大鼠脊髓PKC蛋白表达改变的影响；（3）观察连续吗啡处理对大鼠脊髓G蛋白相关亚型表达的影响，以及鞘内mGluR5 ODN处理对大鼠脊髓G蛋白相关亚型表达的影响；（4）观察大鼠鞘内PLCbeta3 ODN对鞘内吗啡耐受的影响，并经热痛试验观察其对急性吗啡抗伤害作用的影响。.结果：（1）行为学测定示鞘内mGluR5 ODN处理可一定程度上抑制吗啡耐受的发生，维持吗啡镇痛效力；（2）连续慢性吗啡处理，可致大鼠脊髓PKC（α、γ和ε）表达明显增高，而鞘内mGluR5 ODN处理可抑制吗啡耐受所致的PKC亚型蛋白的表达增高，抑制吗啡耐受的发生；（3）耐受发生后，大鼠脊髓内G蛋白（αi,αo,αq,αs和β）表达明显增高，鞘内mGluR5 ODN处理可抑制这种表达增高，调节mGluR5的表达，抑制吗啡耐受的同时可影响耐受所致大鼠脊髓G蛋白的表达；（4）鞘内给予PLCbeta3寡聚脱氧核苷酸处理降低脊髓内PLCbeta3的表达可促发吗啡抗伤害性作用，加速其镇痛效应的出现，并可延长其最长镇痛时程至4小时，而对慢性吗啡处理所致的吗啡耐受，鞘内PLCbeta3寡聚脱氧核苷酸处理可降低慢性吗啡的ED50,并经热痛行为学试验延缓吗啡耐受的发生，抑制吗啡耐受。.结论：鞘内mGluR5 ODN处理可抑制吗啡耐受的发生，并降低耐受所致大鼠脊髓内PKC及G蛋白相关亚型的表达增高，证实mGluR5可能通过调节PKC过程影响吗啡耐受，同时大鼠脊髓G蛋白的表达是反映吗啡耐受发生的一个指标之一。而通过鞘内PLCbeta3寡聚脱氧核苷酸处理降低脊髓内PLCbeta3的表达，在加速急性吗啡抗伤害性作用的同时，可延缓慢行吗啡耐受的发生，维持吗啡镇痛效力，从另一个侧面证实PLCbeta3是影响鞘内吗啡耐受的重要环节，而PLCbeta3在mGluR5影响吗啡耐受的通路中发挥怎样的作用，仍需进一步的研究。