B细胞TRAF2/6介导的CD40信号通路活化在干燥综合征发病中的作用

原发性干燥综合征（pSS）的主要免疫学特征是B细胞过度活化导致的高球蛋白血症和组织炎症损伤。CD40是促使B细胞活化的重要因子，在B细胞中CD40下游的NF-kB和AP-1信号通路主要由构架蛋白TRAF2和TRAF6介导而活化。目前对TRAF2/6介导的CD40活化信号在自身免疫病中所起的作用尚不清楚。我们的前期研究发现B细胞CD0信号通路活化与系统性红斑狼疮发病相关。本课题将进一步探讨B细胞中CD40信号通路在pSS发病和组织损伤中的作用，以及TRAF2/6在介导上述信号通路的作用。研究内容包括：1）pSS患者外周血B细胞是否存在自发的CD40信号通路活化；2）TRAF2/6如何介导CD40下游NF-kB和AP-1信号通路的活化；3）以唇腺组织为模型，研究CD40信号通路以及TRAF2/6在pSS患者受累器官淋巴浸润中的作用。最终确定TRAF2/6是否可能作为pSS治疗的生物靶位。

本研究的目标是:探讨原发性干燥综合征（pSS）患者外周血B细胞CD40信号通路活化异常，以及TRAF2和TRAF6在介导pSS患者B细胞CD40信号通路活化中的作用。结果：1）pSS患者外周血B细胞CD40表达较其他结缔组织病患者升高，pSS患者B细胞TRAF6对B细胞NF-kB的活化作用最强；使用CD154刺激pSS患者外周血B细胞，NF-kB和AP-1信号通路活化与SLE患者相似。2）进一步通过转染野生型TRAF2（WT-TRAF2）和WT-TRAF6质粒以及shRNA-TRAF2/6质粒至pSS患者外周血B细胞中，发现：过度表达TRAF2可增加B细胞核因子p65，p50和C-Rel的核内转移，而无功能性DN-TRAF2则只抑制p65的核内转移。3）采用信号通路抑制剂研究pSS患者外周血CD154诱导的B细胞活化通路，结果：pSS患者CD154刺激的B细胞NF-kB通路中IkBa磷酸化、降解、NF-KB转录因子核内转移与SLE患者相似。进一步发现，沉默或过度表达功能缺失的TRAF2和TRAF6均可抑制P65的核内转移，而TRAF6缺失对P65的核内转移抑制更突出。4）通过将pSS患者外周血B细胞转染野生型TRAF2和sh-RNA-TRAF2质粒，之后提取细胞RNA，进行microarray检测。比较上调或下调的基因。结果提示：在pSS患者，TRAF2基因可调控许多炎症以及B细胞活化和分化的基因。5）pSS患者唇腺病理分为灶性淋巴细胞浸润性唾液腺炎（FLS）、慢性非特异性唾液腺炎（NSCS）或慢性硬化性唾液腺炎（SCS）。经免疫组化分析，患者唇腺浸润的淋巴细胞表达TRAF2。.总结：干燥综合征患者外周血B细胞CD40信号通路存在自发活化现象，表现为CD40下游NF-kB信号通路中IkBa磷酸化和降解增多，P65的磷酸化增多，等。TRAF2和TRAF6在介导患者B细胞CD40活化中起着重要作用，两者的作用有所不同,TRAF6在B细胞CD40信号系统活化中的作用最强。pSS患者唇腺中浸润的淋巴细胞存在TRAF表达，因此推测该分子参与了pSS脏器和组织的损伤过程。