植物特有的类神经钙素B与激酶复合物（CBL1-CIPK23）的晶体结构测定及功能研究

植物感知和应答环境信号，是植物生长和发育的重要生理过程，也是农业可持续发展的重要方面。钙离子是生物体感知和应答环境信号的重要信使。类神经钙素B蛋白（CBLs）是一类新发现的高等植物特有的感知及调控钙离子时空信号的"钙传感器"蛋白。其重要成员CBL1，它感受钙离子信号，并激活下游激酶CIPK23，引发一系列信号通路，提高了植物对干旱、高盐和钾贫瘠的耐受性。但功能机制尚不清楚。本课题拟解析CBL1及与CIPK23复合物的结构，揭示其耐受性功能与结构的关系及作用机理。研究在已克隆三种植物CBL1、CIPK23基因的基础上，利用重组表达、纯化获得复合物蛋白，通过复合物的结晶、优化、X-射线衍射数据收集、指标化、确定相位、结构解析最后确定三维结构。基于CBL1-CIPK23的结构基础，揭示植物耐受性功能与钙介导的CBL1与下游激酶CIPK23复合物结构的关系，分析植物抗性的分子机制

植物感知和应答环境信号，是植物生长和发育的重要生理过程。钙离子是生物体感知和应答环境信号的重要信使。类神经钙素B蛋白（CBLs）是一类新发现的高等植物特有的感知及调控钙离子时空信号的“钙传感器”蛋白。其重要成员CBL1，它感受钙离子信号，并激活下游激酶CIPK23，引发一系列信号通路，提高了植物对干旱、高盐和钾贫瘠的耐受性。.本项目首先克隆构建了AmCBL1的野生型和六个降低活化熵突变体的表达载体和融合MBP表达载体，表达目标蛋白，分离、纯化、结晶获得了适合衍射的单晶。在同步辐射衍射获得2.9Å的数据。处理后空间群为P21212，晶胞参数为a=99.87Å, b=114.42Å, c=63.80Å, alpha=β=r=90.00。通过复杂的分子置换和重原子SAD方法获得了该蛋白结构的初解，进一步的精修和结构功能分析尚在处理。.以AtCBL1和AtCIPK23为基础构建了AtCBL1和AtCIPK23的NAF结构域的共表达及共转化的表达载体，共转化表达、分离纯化获得了两个蛋白的复合物，筛选结晶获得了可衍射的单晶。但分辨率太低没有合适的数据。以AmCBL1的M33突变体蛋白和NAF结构域的表达载体，双抗性共同转化感受态细胞，表达、分离纯化获得复合物的蛋白样品。以甲基化修饰获得了相对单一成分的复合物蛋白，结晶筛选获得了可衍射的单晶。由于上海同步辐射机时的限制，在等待时间收集数据。