汉族人群IPS－1基因多肽性在慢性乙型肝炎干扰素应答中调控机制的研究

干扰素β启动子刺激因子IPS-1是启动内源性干扰素表达和分泌的关键分子，对机体NDV，VSV，ECMV，HCV等病毒感染的识别和清除发挥重要作用。单核苷酸多态性SNP与抗病毒治疗相关性是抗病毒机制研究的新热点，为个体化医疗开辟了新途径。本课题在前期IPS-1研究的基础上，对接受干扰素治疗的汉族慢性乙型肝炎患者IPS-1SNP位点：rs17857295、rs7262903和rs7269320的大样本病例对照分析，结合不同患者临床特征和干扰素应答，研究SNP位点基因型在不同干扰素疗效患者中的差异表达；构建IPS-1慢病毒载体，利用定点突变技术获得各SNP基因型表达载体；应用细胞学和分子生物学技术研究IPS-1表达、IFN分泌及HBV动力学改变等，探讨SNP位点不同基因型对IPS-1功能的影响，并找到可能的靶基因，为慢性乙型肝炎抗病毒新的免疫机制的阐明以及寻找治疗新靶点提供实验依据。

背景和目的：单核苷酸多态性与抗病毒治疗的相关性是抗病毒机制研究的新热点。本课题探讨不同SNP位点基因型对慢性乙型肝炎病毒感染后IPS-1功能和慢乙肝干扰素疗效的影响，为慢性乙型肝炎抗病毒新的免疫机制的阐明以及寻找新的预测指标提供实验依据。研究内容：采集212名接受PEG-IFN治疗48周的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血，应用时间飞行质谱技术检测IPS-1、IL28B基因共13个SNP位点的多态性，统计分析研究不同SNP位点基因型与慢性乙型肝炎干扰素疗效的关系；构建IPS-1慢病毒载体，利用定点突变技术获得不同SNP基因型表达载体，应用分子生物学等技术研究探讨不同SNP位点基因型对IPS-1功能的影响。研究结果：应答患者(R)74人，无应答者(NR)138人，应答率为34.9%。4个IPS-1 SNP位点(rs2326369, rs2464, rs6515831, rs16989000)的基因型分布在两组之间存在明显差异；多因素分析，只有rs2326369(N-CC), rs6515831(TT), rs2464(CC)3个SNP位点与PEG-IFN应答独立相关；单体域（rs7272495-rs16989022-rs2464）A-A-C单体型与R显著相关。IL28B SNP位点(rs12980275, rs12979860, rs8099917)等位基因的频率和基因型的分布在两组之间均有明显差异；多因素分析发现IL28B野生纯合基因型(AA, CC, TT)是PEG-IFN高应答率的独立预测因素；单体域(rs12980275-rs12979860)A-C单体型与R显著相关。IPS-1野生型和rs7269320分别转染细胞后，目的基因mRNA表达量明显增加，IPS-1蛋白量、NF-kB启动子活性和IRF3/7启动子活性却无明显增加；IPS-1 rs7262903和s17857295分别转染细胞后，目的基因mRNA表达量、IPS-1蛋白表达量、IRF3/7和NF-kB启动子的活性均明显增加。结论：IPS-1、IL28B基因多态性与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者对PEG-IFN治疗的应答密切相关。IPS-1 rs187857295和rs7262903两个位点突变后影响了IPS-1蛋白的稳定性，这两个位点可能就是IPS-1蛋白在受到病毒刺激后发生泛素化变化的位点。