健脾清化方基于MTP-ApoB脂质转运途径干预干扰素抗丙肝病毒机制的体外研究

Chronic hepatitis C is easy occurrence with steatosis, the combination of interferon and ribavirin is the standard scheme of anti hepatitis C virus，but steatosis in chronic hepatitis C always leads to the interferon antiviral failure,antisteatosis treatment may be a new breach in improving interferon antiviral efficacy.MTP-ApoB is the critical pathway in intrahepatic lipid transport,studies show that HCVcore proteins caused ApoB transport VLDL barrier by inhibiting the activity of MTP and leads to lipid deposition.Our previous study found that Jianpi Qinghua Decoction(JPQH) can alleviate steatosis and improve the interferon antiviral efficacy and may be related with improving leptin -insulin resistance,but lack of deep research about core protein and MTP-ApoB pathways.Based on this,we plan use JPQH, PEG-interferon, JPQH combined with PEG-interferon drug serum to intervent HepG2 cell lines infected by genotype 3a hepatitis C patients serum ,observe regulation of Chinese medicine on MTP-ApoB pathway；relationship between lipid droplets and the core protein,to clarify the mechanism of "invigorating spleen and draining dampness and wet" therapy in improving the steatosis and anti HCV efficacy of interferon.The study will provide a new idea and perspective for the treatment in chronic viral hepatitis with traditional chinese and medicine.

慢性丙肝极易发生脂肪肝，干扰素联合利巴韦林是抗丙肝病毒的标准方案，但丙型发生脂肪肝后往往导致该方案治疗失败，因此改善脂肪肝成为提高干扰素抗病毒疗效新的突破口。MTP-ApoB是肝内脂质转运的关键途径，研究显示HCVcore蛋白抑制MTP活性造成ApoB转运脂质障碍是肝脂肪变的主因。前期研究表明健脾清化方可显著提高干扰素抗病毒疗效，并证实与改善瘦素-胰岛素抵抗有关，但缺乏对MTP-ApoB这一关键途径影响的深入研究。因此本课题拟以MTP-ApoB途径为主线，通过分别应用健脾清化方、干扰素、健脾清化方联合干扰素药物血清干预基因3型丙肝病毒阳性血清感染的HepG2细胞，从体外角度观察中药对MTP-ApoB途径的调控作用以及对core蛋白与肝内脂滴关系的影响，以期阐明健脾清化方改善肝脂质代谢与提高干扰素抗病毒疗效的关系，论证中医"健脾清热化湿"治法的科学内涵，为中医药治疗慢性丙型肝炎提供新的思路。

慢性丙型肝炎合并肝脂肪变后往往导致干扰素抗病毒失败，因此改善肝脏脂质代谢的治疗成为提高干扰素抗病毒疗效新的突破口。MTP-ApoB是肝内脂质转运的关键途径，研究显示HCVcore蛋白通过抑制MTP活性造成ApoB转运VLDL障碍是形成肝脂肪变的主因。前期健脾清化方在提高干扰素抗病毒疗效方面显示了良好的应用前景，并证实与改善肝脂肪变有关，但缺乏对MTP-ApoB这一关键途径影响的深入研究。因此本课题拟以MTP-ApoB途径及core蛋白为主线，通过健脾清化方、干扰素、健脾清化方加干扰素药物血清分别干预丙肝病毒阳性血清感染的HepG2细胞，从体外角度观察中药对脂质代谢，MTP、ApoB、core蛋白表达，core蛋白与脂滴定位关系的影响。本实验通过体外观察用慢性丙型肝炎患者血清感染的 HepG2 细胞上清中 ApoB、 VLDL、 TG 含量及 HepG2 细胞中 HCV-RNA 滴度的变化。与大鼠含药血清干预后对比发现，健脾清化方干预后不仅脂质代谢（ApoB、VLDL、TG）较前好转， HCV-RNA 滴度亦优于西药组，表明健脾清化方可以提高干扰素抗丙肝病毒的疗效，并初步证实了健脾清化方可能通过提高肝细胞 MTP-ApoB 通路的活性抑制病毒复制，电镜观察进一步证实了健脾清化方可有效减少丙肝病毒core 蛋白与脂质结合，加速VLDL 从肝细胞的转运而改善肝脏脂质沉积，从而使干扰素充分发挥抗病毒作用。Real-TimePCR结果提示中药对病毒无明显抑制作用，但可通过促进脂质代谢关键环节MTP-ApoB途径中ApoB蛋白mRNA的表达，提高细胞内MTP蛋白的表达，并可明显减少脂质沉积及core蛋白与脂质的结合，进一步减少脂质和病毒形成的脂质病毒颗粒（LVPs），从而抑制病毒复制。本研究证实体外健脾清化方药物血清可以提高干扰素抗丙肝病毒的疗效，其机制与其调控MTP-ApoB 途径有关，从微观及脂质代谢的角度证实了课题的假说，初步阐明了中医“健脾清热化湿”治法改善脂质代谢与提高干扰素抗病毒疗效的内在联系，为中医药治疗慢性丙肝提供了新的思路和视角。