Treg细胞介导的免疫失衡在H.pylori与HCV协同致病中的作用机制及健脾清化方的干预研究

HCV patients were easy to Combined with H.pylori(Hp) infection, this kind of patients with the disease progress faster, and prone to liver fibrosis and liver cancer, but its mechanism is unknown. Recent studies have shown that Treg cells can induce immune disorders and insulin resistance, which accelerated HCV and H.pylori synergistic pathopoiesis process. Our previous studies suggested that Jianpi Qinghua Decoction can effectively inhibit the growth of Hp and HCV replication, improve insulin resistance and liver damage, and adjust the balance of the Th1/Th2, but its effect on Treg cells remains to be elucidated. This project aims to observe the changes of immune cells by patients with different stages of chronic hepatitis C, science technology screening associated with H.pylori infection and replication of HCV material by metabolic pathway, and through the establishment of transgenic mice of HCV virus gene structure models of H.pylori infection, to observe the effect of Jianpi Qinghua Decoction on Treg cell model, Th1/Th2, Th17, insulin resistance and related cytokines, clear HCV H.pylori infection combined with the core mechanism of mutual promotion, to elucidate the core mechanism of Treg cells in regulation effect of Jianpi Qinghua Decoction on immune imbalance, and provides a new idea for Chinese medicine treatment of chronic hepatitis C.

HCV患者易合并H.pylori感染，该类患者病情进展快，更易发生肝纤维化甚至肝癌，但其具体机制不明。新近研究表明，Treg细胞可能通过诱导免疫失调及胰岛素抵抗，加速HCV与H.pylori协同致病的进程。我们前期研究提示，健脾清化方可有效抑制Hp生长和HCV复制，改善胰岛素抵抗，修复肝损伤，并调整Th1/Th2平衡，但其对Treg细胞的影响有待于进一步阐明。本项目拟通过观察不同阶段慢性丙型肝炎患者免疫细胞的变化，通过代谢组学技术筛选与H.pylori感染与HCV复制相关的物质通路，并通过建立H.pylori感染HCV病毒结构基因转基因小鼠模型，观察健脾清化方对模型Treg细胞、Th1/Th2、Th17、胰岛素抵抗、相关细胞因子的影响，明确HCV合并H.pylori感染相互促进的核心机制，健脾清化方对Treg细胞为核心免疫失衡的调节作用，为中医药治疗慢性丙型肝炎提供新思路。

辅助调节性T细胞Treg是一类具有免疫抑制作用的调节细胞，去除CD4+CD25+Treg细胞可以增强机体对多种病原体的抗感染免疫的作用；Th17细胞在防御胞外细菌感染、介导慢性炎性反应以及自身免疫病等方面发挥着重要作用，Th17细胞分泌IL-17、IL-6、IL-22，Treg细胞分泌IL-4和IL-10，两者在免疫功能上互相拮抗成为维持肝内免疫稳态的重要因素；Th1细胞分泌IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α等，主要效应是增强吞噬细胞功能，介导机体细胞免疫反应；健脾清化方在提高干扰素抗病毒疗效方面显示了良好的应用前景，并证实与改善肝脂肪变有关，但健脾清化方对HP感染的HCV转基因小鼠模型治疗作用及免疫机制尚不明确。因此本课题通过建立小鼠慢性HP感染的HCV转基因小鼠模型模型，观察健脾清化方对慢性HP感染的HCV转基因小鼠模型模型Treg细胞、Th1、Th17细胞以及相关细胞因子的影响，明确健脾清化方对以Treg细胞为核心的免疫失衡的调节作用。本实验通过构建小鼠慢性慢性HP感染的HCV转基因小鼠模型，分别应用健脾清化方、丽珠得乐药物干预模型，采集小鼠胃、肝脏、脾脏标本。Western Blot检测显示慢性HP感染的HCV转基因小鼠模型小鼠肝组织中IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α的表达较正常小鼠显著上调，健脾清化方可下调慢性HP感染的HCV转基因小鼠模型小鼠肝组织中IL-2、IL-12、TNF-α的表达；流式细胞术检测脾脏细胞中CD4+CD25+Treg细胞、CD4+IL-17 Th17细胞比例变化，与对照组比较，HP感染的HCV转基因小鼠模型模型Treg细胞比例明显升高，而Th17细胞比例并不是相应降低，而是同样显著升高，健脾清化方可逆转慢性HP感染的HCV转基因小鼠模型导致的Treg细胞及Th17细胞比例的升高；IHC检测发现慢性HP感染的HCV转基因小鼠模型模型小鼠胃粘膜组织中CD4和CD25表达与正常小鼠相比明显升高，健脾清化方可下调CD4的表达；电镜观察进一步证实了健脾清化方对慢性HP感染的HCV转基因小鼠模型小鼠的治疗作用；通过以上结果分析在慢性HP感染的HCV转基因小鼠模型模型中免疫失衡的机制可能是活化的Th1细胞通过分泌IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α促进小鼠体内Th17/Treg平衡打破。