中药材上赭曲霉毒素A（OTA）产生菌的多样性及定量检测

在中药生产、加工、流通过程中，由真菌引起的发霉现象十分普遍，真菌污染不仅导致药材品质的降低，更危险的是产生真菌毒素，危及人体健康。赭曲霉毒素A（OTA）属剧毒物质，是由曲霉属、青霉属真菌产生的常见毒素之一。我国作为中药材的主产地及最大出口国，至今没有对中药材上OTA污染情况及其产生菌进行过系统研究。本项目拟采用HPLC方法对常用中药材OTA污染情况进行分析，针对其中污染严重的药材，采用传统分离方法及PCR-SSCP技术对OTA产生菌的多样性和分布进行系统研究，同时探讨菌株产毒素的环境条件，从而阐明中药材上OTA污染发生的生物及环境基础；另外针对OTA产生菌，建立基于毒素特异基因的Real-time PCR检测体系，实现对中药材上多种OTA产生菌的分子定量检测，解决传统检测方法费时、费力、存在安全隐患的缺陷。本研究可为真菌污染药材的风险评估和污染治理提供依据，对保障药材质量安全具有重要意义。

在中药材生产、加工、流通过程中，由真菌引起的发霉现象十分普遍，真菌污染不仅导致药材品质的降低，更危险的是产生真菌毒素，危及人体健康。赭曲霉毒素A（OTA）属剧毒物质，是由曲霉属、青霉属真菌产生的常见毒素之一。本项目从不同产地，不同药用部位的50余种药材中选择了OTA污染严重的种类，采用传统分离方法及PCR-SSCP技术对OTA产生菌的多样性和分布进行了系统研究，同时探明了菌株的产毒条件。结果表明根类药材是OTA污染最严重的种类，其中尤以甘草污染量最高，达84.4 µg/kg，远超出药材中OTA的限量标准。不同OTA污染水平的药材具有其相对应的污染菌类群，Penicillium polonicum是药材上最主要的OTA产生菌，其产OTA的能力为国内外首次报道。首次建立了基于ß-tubulin基因的非培养真菌多样性研究技术体系，并应用于中药材上的污染真菌群落研究，加深了对药材中污染真菌多样性的认识。通过研究Penicillium polonicum的产毒条件发现，OTA在该菌生长7天时就已大量生成，在温度33℃，湿度0.99aw下产量最高。首次针对产毒菌Penicillium polonicum建立了基于毒素基因的Real-time PCR检测体系，实现了对中药材上主要OTA产生菌的定量检测。通过本项目系统阐明了中药材上OTA发生的生物基础及环境基础，建立的定量检测方法解决了传统检测方法费时、费力、存在安全隐患的缺陷。对药材污染真菌的风险评估，保障其质量安全具有重要的学术及应用意义。