基于miR-655靶向CLCF1调控JAK/STAT通路探讨绝经后骨质疏松症肾阴虚证的机制研究

Kidney deficiency is the major pathogenesis of osteoporosis,but the molecular regulation mechanism remains unclear.Our previous study found that CLCF1 mediated JAK/STAT signaling pathway may be the molecularregulation mechanism of postmeno pausal osteoporosis (POP) with KidneyYin Deficiency;further studyfound that miR-655 can inhibit the expression CLCF1.We propose a hypothesisthat miR-655 regulate the JAK/STAT pathway by targeting CLCF1 may be a new molecular mechanism of POP in kidney yin deficiency syndrome. First of all,we detect the expression levels of miR-655 and CLCF1 by using qRT-PCR and Western blot technology. Secon dly,we observe the expression of miR-655 and CLCF1 before and after treatment with Liu weidihuan pill.Thirdly,we conducttheexperiment of miR-655 interference and overexpression to observe its effects on CLCF1 and JAK/STAT pathway.This study is expected to further enrich the pathogenesis theory of kidney yin deficiency syndrome,and to provide scientific basis for the molecular essence explain the syndromes of traditional Chinese medicine from the angle of miRNA...

肾虚是骨质疏松症的主要病机，但其分子机制尚未阐明。课题组前期研究发现，绝经后骨质疏松症（POP)肾阴虚证的分子调控与CLCF1介导JAK/STAT信号通路相关；进一步研究发现miR-655能靶向抑制CLCF1的表达。提示：miR-655通过靶向CLCF1调控JAK/STAT通路可能是POP肾阴虚证的分子机制之一。本研究拟：①用qRT-PCR和western blot技术检测miR-655、CLCF1的表达水平，探讨miR-655与POP肾阴虚证的相关性；②以药测证观察六味地黄丸治疗前、后miR-655和CLCF1的表达变化，佐以证明。③通过miR-655干扰和过表达实验，观察其对CLCF1及JAK/STAT通路的影响，揭示miR-655靶向CLCF1调控JAK/STAT通路的作用机制。旨在从miRNA角度阐明POP肾阴虚证的分子实质，为POP的中医药防治提供实验依据。

骨质疏松是人口老年化社会需要重点关注的一个疾病，miRNA对骨代谢和骨的发育重建至关重要。鉴于前期研究结果：miR-655靶向调控CLCF1基因，而CLCF1介导 JAK/STAT信号通路与POP肾阴虚证有关，因此我们提出：miR-655靶向调控CLCF1及下游JAK/STAT信号通路可能是POP肾阴虚证的分子机制。本课题通过病例对照研究，比较绝经后骨质疏松症（POP)肾阴虚证和对照组的miR-655、CLCF1 表达水平的差异性；以药测证方式，观察六味地黄丸治疗对其表达的影响；结合细胞功能实验，观察miR-655基因沉默和过表达对MG63细胞增殖、细胞周期、凋亡和JAK-STAT信号通路及OPG/RANKL表达的影响。结果：（1）与对照组比较，POP 肾阴虚证组miR-655表达上调， CLCF1mRNA和蛋白表达较对照组明显下调。（2）六味地黄丸治疗对hsa-miR-655的表达未见明显影响，但能够显著上调 CLCF1 的表达水平。（3）miR-655沉默对MG63细胞的CLCF1基因表达未见明显影响，而过表达 miR-655能显著抑制MG63细胞的增殖；使 MG63细胞G1期阻滞，S期比例减少，从而延缓细胞周期进程；同时， miR-655能负调控CLCF1的表达，抑制 JAK1/STAT4信号通路中 JAK1、STAT4 的磷酸化水平，并下调OPG/RANKL比值。. 结合文献分析，课题组认为：miR-655是 POP肾阴虚证一个关联基因，miR-655能负调控CLCF1基因表达，抑制JAK1/STAT4信号通路中的激活，阻遏成骨样细胞MG63的增殖和细胞周期进展，促进RANKL、OPG表达并下调OPG/RANKL的比值。这可能是miR-655介导CLCF1基因参与POP的分子机制之一。本项目以miRNA及其调控网络为切入点探讨POP肾阴虚证的生物学基础，为中医证候的研究提供了新的视角，对于中医理论发展具有重要意义。