GRK4变异体A142V对内皮素B型受体的调控在原发性高血压发生中的作用研究

肾脏ETB受体介导的尿钠排泄作用在血压调控中发挥重要作用。高血压状态下肾脏ETB受体功能障碍伴有磷酸化水平升高，但其发生的原因尚不明了。我们既往的研究发现G蛋白激酶(GRK)4变异体A142V转基因小鼠血压升高、尿钠排泄障碍，伴有肾脏ETB受体磷酸化水平增加，因而推测"A142V是引起肾脏ETB受体功能障碍的原因"。本研究应用A142V转基因小鼠和A142V转染的HEK293细胞为研究对象，一方面观察A142V对ETB受体表达和功能的影响，另一方面研究A142V影响ETB受体的环节和机制，研究A142V是通过与ETB受体的直接连结、还是通过PLC等中间信号间接影响ETB受体的表达和功能的，此问题的解决有助于揭示肾脏ETB受体功能障碍的机制，为恢复高血压状态下肾脏ETB受体的功能提供理论基础。

背景 肾脏ETB受体介导的尿钠排泄作用在血压调控中发挥重要作用。高血压状态下肾脏ETB受体功能障碍伴有磷酸化水平升高，但其发生的原因尚不明了。我们既往的研究发现G蛋白激酶(GRK)4变异体A142V转基因小鼠血压升高、尿钠排泄障碍，伴有肾脏ETB受体磷酸化水平增加，因而推测“A142V是引起肾脏ETB受体功能障碍的原因”。方法 本研究应用A142V转基因小鼠和A142V转染的RPT细胞为研究对象，一方面观察A142V对ETB受体表达和功能的影响，另一方面研究A142V影响ETB受体的环节和机制，研究A142V是通过与ETB受体的直接连结、还是通过PLC等中间信号间接影响ETB受体的表达和功能的。结果 A142V转基因小鼠血压明显高于野生型（WT）小鼠。在基础状态下，两组24小时尿钠排泄并无明显差别，但ETB受体激动剂（BQ3020）全身灌注后，WT小鼠尿钠排泄率明显高于A142V转基因小鼠，且这种效应呈浓度依赖性，提示A142V转基因小鼠ETB受体功能受损。进一步研究发现，虽然ETB受体在WT和A142V小鼠肾脏上蛋白表达并无明显的差别，但是其磷酸化水平在A142V小鼠肾脏上明显高于WT,提示ETB受体的高磷酸化可能是导致其功能受损的主要原因。A142V导致ETB受体功能障碍的作用在细胞水平同样得到验证。在转染GRK4 A142V基因或野生型（WT）基因的肾近曲小管细胞（RPT）上，给予ETB受体激动BQ3020(10-8mol/L)孵育24小时后，GRK4野生型RPT细胞Na+-K+-ATPase活性明显低于转染GRK4 A142V RPT细胞。另外，激光共聚焦和免疫共沉淀结果表明， GRK4和ETB受体在RPT细胞存在物理连接和共存现象，提示GRK4 A142V可能直接作用ETB受体，使ETB受体磷酸化，从而导致ETB受体的功能障碍。目前已完成该项目所规定的内容，发表SCI论文3篇共计影响因子12.26，后续结果预计再发表论文一篇。培养2名博士生和1名硕士生。