腺相关病毒介导IκBαM基因转染骨髓间充质干细胞治疗慢性胰腺炎的实验研究

慢性胰腺炎以胰腺实质持续性炎性损害和纤维化为主要病理表现，目前尚无有效治疗办法。胰腺星状细胞(PSC)在胰腺纤维化中起核心作用，而NF-κB 在胰腺纤维化形成早期胰腺组织炎症反应和后期PSC活化中发挥重要作用。本课题利用骨髓间充质干细胞(MSCs)修复重建、抗纤维化等生物学潜能, 并利用其作为基因载体的独特优势，用腺相关病毒将NF-κB 超抑制物IκBαM基因转染至MSCs构建IκBαM-MSCs：将其植入慢性胰腺炎动物模型，体内观察研究其"环状双相"的治疗效果和作用机制；体外将IκBαM-MSCs与PSC直接/间接共培养，观察其微环境的生物学变化，应用基因芯片筛选特异的基因变化序列，以寻找新的抗胰腺纤维化分子作用位点，为临床治疗慢性胰腺炎提供新的思路。

在本研究中，我们将转染核因子-κΒ抑制剂基因阿尔法突变体（IκBαM）后的骨髓间充质干细胞回输到大鼠慢性胰腺炎模型中，并与胰腺星状细胞（PSCs）共培养，观察其（IκBαM - MSC）对二者的影响，从而为慢性胰腺炎的治疗提供证据。我们将120只SD大鼠随机分为6组：A组（20只大鼠注射用无菌生理盐水），B组（20只大鼠注射同种异体骨髓间充质干细胞），C组（C1组20只大鼠体外培养的同种异体IκBαM - MSC在CP模型前4小时；C2组20只大鼠CP模型注射体外培养的同种异体IκBαM-MSC，在制作CP模型的同时；C3组20只大鼠注射体外培养的同种异体IκBαM-MSC,在制作CP模型4小时后），D组（20只大鼠注射rAAV2 -MSC）。检验各组大鼠中ICAM-1，CTGF，IL-1，IL-6，IL-8，TNF-α，TIMP-1， TIMP-2，IL-10，FN，MMP-1，MMP-2，MMP-3和MMP-9浓度。结果表明，同种异基因IκBαM-MSC可以减少促炎性细胞因子水平和增加抗炎因子在CP中的浓度。这项研究表明，同种异基因IκBαM-MSC可以减少PSCs的激活，促进大鼠CP模型中PSCs凋亡。在研究中，我们发现，IκBαM-MSC可以通过调节PPAR信号通路、MAPK信号转导通路、mTOR信号通路、TGF-β信号转导通路、NOD样受体信号通路、Notch信号通路、WNT信号转导通路、TGF-β1-SMAD-2/3信号转导通路、P53信号转导通路等的激活，影响PSC的增殖和凋亡。