脂肪组织外泌体miR-326调控多囊卵巢综合征高雄激素血症形成的分子机制研究

miRNA-326 is one of miRNAs significantly decreased in adipose tissue derived exosomes in patients with polycystic ovary syndrome(PCOS) and hyperandrogenism based on our previous miRNA array finding. Preliminary data showed adipose tissue derived exosomes significantly promote androgen synthesis in rat preantral follicles in vitro. Further bioinformatics analysis and experiments indicated that NR5A1 is a candidate target gene of miRNA-326, which activates the genes involved androgen production (StAR, CYP11A1 and CYP17A1) as a transcriptional factor. Hence, Using a rat preantral follicle culture model coupled with adenoviral gene manipulation procedures, we will examine the function of miRNA-326 in androgen production and the possible involvement of NR5A1. The current study will elucidate the regulatory mechanism, which may provide a theoretical basis for the targets of the treatment and prevention of hyperandrogenism in PCOS.

miR-326是我们通过芯片筛选获得的，差异低表达于多囊卵巢综合征高雄激素血症患者（PCOS/HA）脂肪组织外泌体中的miRNA。前期研究发现PCOS/HA脂肪来源外泌体可显著促进卵泡膜细胞雄激素合成。miR-326显著低表达于PCOS/HA脂肪组织外泌体中且在PCOS中功能未知。生物信息学及实验表明NR5A1可能是miR-326调控的靶基因，文献报道NR5A1可调控StAR、CYP11A1和CYP17A1促进雄激素的合成。本文拟利用卵泡体外培养及重组腺病毒技术，探讨脂肪组织外泌体miR-326在雄激素合成中的作用，以NR5A1为机制线索，系统分析脂肪组织外泌体中的miR-326在PCOS/HA形成中的机制。目前尚未见有关miR-326在PCOS/HA中的研究，如获成功将也为PCOS/HA的防治提供新的干预靶标。

多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是一种常见的妇科内分泌疾病，累及5%～10%的育龄妇女，不但严重影响患者的生殖功能，同时也会导致雌激素依赖性肿瘤、相关的代谢失调疾病的增加，严重影响育龄妇女的身心健康。目前PCOS无有效的治愈方案，因此，进一步揭示PCOS的发病机制，寻找PCOS新的防治靶标，已成为妇科内分泌领域亟待解决的难题。miR-326是我们前期应用miRNA芯片技术于PCOS高雄激素血症患者脂肪组织外泌体发现的差异miRNA，其含量降低并且在PCOS中的功能未知。前期研究发现下调miR-326可促进卵泡膜细胞雄激素生成。实验初步证实，通过调控StAR、CYP11A1和CYP17A1促进雄激素合成的NR5A1可能是miR-326的靶基因。我们①构建PCOS大鼠模型并提取PCOS大鼠脂肪组织外泌体与大鼠卵泡细胞共培养，通过ELISA、Realtime-PCR等技术检测卵泡细胞雄激素、雄激素合成关键酶、NR5A1及miR-326表达情况，结果提示脂肪组织外泌体可以促进卵泡膜细胞雄激素的合成；②对卵泡细胞miR-326进行过表达或沉默，并通过ELISA、Realtime-PCR等技术检测卵泡膜细胞雄激素及雄激素合成关键酶表达情况，结果提示miR-326参与雄激素合成关键酶表达的调控，且miR-326表达与卵泡膜细胞雄激素合成呈负相关；③通过荧光素酶报告系统进一步证实NR5A1是miR-326调控的靶基因，并通过挽救实验证明脂肪组织外泌体miR-326可通过负调控靶基因NR5A1参与卵泡雄激素合成。以上结果提示脂肪组织外泌体miR-326通过NR5A1调控卵泡雄激素合成进而参与PCOS高雄激素血症形成，对于理解PCOS高雄激素血症形成的机制，为PCOS的防治提供新的靶标。