基于端粒-p53通路、shelterin研究肾主骨生髓在再生障碍性贫血骨髓衰竭中发病的分子机制

"Kidney controlling bones and producing marrow" in TCM Classic Theories neijing has practical singnificance to interpret and research pathogenesis, prognosis and to put forward traditional Chinese medicine treatment strategies and ideas of the bone marrow exhaustion disease. Bone marrow exhaustion disease is a group of hematopoietic dysfunction disease. Aplastic anemia is common in bone marrow exhaustion disease.Studies found that shorten telomere, telomerase and telomere related protein abnormal expression play an important role in pathogenesis of aplastic anemia. Guided with Chinese medicine classical theory, we use an entry point with telomere-p53 pathway, TERT, dyskerin, shelterin and MRE11,Ku80,RPA1 to look for the relationship of clinical and pathogenic between traditional Chinese medicine theory "kidney controlling bones and producing marrow" and aplastic anemia .Combine with bone marrow pathology, bone marrow cytology, peripheral blood and Traditional Chinese medicine syndromes of aplastic anemia , molecular mechanism of bone marrow with aplastic anemia can be further researched.Specific changes in the expression of these genes in aplastic anemia may provide new knowledge about oncogenesis and useful clinical markers, but would also lead to the development of new therapeutic agents.

中医经典《内经》"肾主骨生髓"理论，用于解释研究骨髓衰竭性疾病，对该病发病机制、预后及提出中医药治疗策略和理念均具有现实意义。骨髓衰竭性疾病是一组以造血功能不良为主的疾病。再生障碍性贫血（简称再障）是血液病中常见的骨髓衰竭性疾病，有研究发现，端粒缩短、端粒酶及端粒相关蛋白异常表达在再障发病中起重要作用。我们以中医经典理论为指导，以端粒-p53通路、端粒酶（TERT、dyskerin）及端粒相关蛋白（shelterin、MRE11、Ku80、RPA1）为切入点，从分子水平来寻找中医肾生骨髓理论与再障临床及发病的结合点，并结合骨髓病理学、骨髓细胞学相关检查及外周血表现共同分析，同时结合再障的中医证候，进一步研究肾主骨生髓在再障骨髓衰竭发病中的分子机制，以期通过发现这些基因、蛋白表达的变化，对再障的发病机理提供新的认识和有用的临床标记，也为开发新的治疗药物提供临床靶点。

一、项目的背景. 再生障碍性贫血（AA）简称再障，是血液病中常见的骨髓衰竭性疾病。端粒、端粒酶以及端粒相关蛋白的表达异常可能是导致再障发病的重要因素之一。再障主要病变部位在骨髓，基本病机在于肾虚髓枯。肾虚、端粒长度、端粒酶活性与细胞凋亡、衰老有密切的关系，结合中医“肾生骨髓”、“肾主封藏”等理论，补肾可以保持端粒的稳定，从而延缓细胞的凋亡、衰老。.二、主要研究内容. 通过外周血常规指标、骨髓细胞学及骨髓病理学检测，评价再障患者骨髓衰竭程度；检测再障患者骨髓单个核细胞的端粒长度，端粒酶及端粒相关蛋白的表达水平，结合再障中医证型分析上述指标变化特点，来研究再障肾虚髓枯发病的分子机制。.三、重要结果及关键数据. 1. 再障患者骨髓造血细胞成分及CD34+细胞占有核细胞百分比较对照组明显减少（P＜0.05）。. 2. 再障患者TRF1、TPP1 mRNA表达水平较对照组明显升高（P＜0.05）；TERT、dyskerin、TRF2、POT1、TIN2、RAP1、MRE11、Ku80、RPA1 mRNA表达水平较对照组明显降低（P＜0.05）；端粒长度较对照组明显缩短（P＜0.05）。. 3. 中医各证型间，TRF1、TPP1在肾阴虚型最高，肾阴阳两虚型次之，肾阳虚型再次之；TERT、dyskerin、TRF2、TIN2、POT1、RAP1、MRE11、Ku80、RPA1在肾阴虚型中最低，肾阴阳两虚型次之，肾阳虚型再次之；端粒长度在肾阴虚型中最短，肾阴阳两虚型次之，肾阳虚型再次之。. 4. 再障患者p53、p21蛋白表达水平均较对照组明显升高（P＜0.05）。. 5. TIN2 mRNA表达水平与白细胞及淋巴细胞有明显相关性；端粒长度、POT1 mRNA表达水平与年龄有明显相关性；TERT mRNA表达水平与红细胞及血红蛋白有明显相关性。. 6. 端粒长度、端粒酶、端粒相关蛋白表达水平之间存在着相关性。.四、科学意义. 本研究以中医经典理论为指导，结合再障肾虚的中医证候，通过分析再障骨髓上述指标的变化，从分子水平阐明了再障肾虚髓枯的发病机制，更好的将中医传统经典理论与现代医学相联系，为再障中医药治疗策略和理念的提出提供了实验及理论支持。