抗甲状腺药物致Graves病患者粒细胞缺乏相关miRNA的鉴定及功能研究

应用miRNA芯片、荧光定量PCR和Northern blot方法结合生物信息学分析，发现抗甲状腺药物致Graves'病患者粒细胞缺乏相关miRNA及其作用的靶基因，设计相关的抗miRNA的反义寡核苷酸（下调miRNA）和合成pre-miRNA（上调miRNA），改变外周血单个核细胞相关miRNA簇表达水平，观察细胞分化、增殖及凋亡情况以及相关基因的mRNA和蛋白表达的变化；通过建立转基因高表达或低表达相应miRNAs大鼠模型，从整体水平上研究相关miRNAs对大鼠骨髓造血及粒细胞生物学性状的影响。本项目通过研究miRNA与ATD导致粒细胞缺乏的关系，可望阐明miRNA在粒细胞缺乏发生中的作用机制，为ATD临床安全用药提供参考依据，也为ATD或其他原因导致粒细胞缺乏的治疗提供新的靶点和思路。

抗甲状腺药物（ATD）最严重的副作用是导致粒细胞缺乏，目前其发病机制不明确。本研究采用骨髓细胞学检查、miRNA芯片检测、荧光定量PCR、流式细胞仪、慢病毒载体、Western-blot、免疫组化等实验方法分析ATD导致粒细胞缺乏骨髓特点及血浆相关miRNA及其功能。我们发现：1、ATD导致粒细胞缺乏患者骨髓象可以分为粒系再生障碍型和成熟障碍型两类，以粒系再生障碍型为主，再生障碍型患者较成熟障碍型患者粒细胞恢复慢，发热时间长，预后差。2、获得ATD导致粒细胞缺乏发生相关的血浆miRNA谱，ATD致粒细胞缺乏的miRNA表达变化与服用ATD类别及骨髓特点分类无明显相关。粒细胞缺乏时差异低表达的miRNA与细胞凋亡相关。3、miR-20a可抑制HL-60、U-937细胞生长，促进其凋亡。其对HL-60细胞生长抑制及凋亡促进作用较U-937细胞更加明显。 4、PTEN是miR-20a调控粒细胞凋亡的靶向基因，PTEN通过影响PI3k/Akt-Bcl-2信号通路在ATD导致粒细胞缺乏的发生过程中起作用。5、miR-20a高表达和低表达慢病毒载体可以实现SD大鼠血浆miR-20a的相应表达变化，miR-20a低表达后SD大鼠外周血粒细胞计数较高表达组减少，但是各组大鼠骨髓增生无明显异常。上述研究结果证实ATD导致粒细胞缺乏与粒细胞凋亡增加有关，miR-20a通过靶向PTEN调控PI3k/Akt-Bcl-2凋亡信号通路在ATD导致粒细胞缺乏的发生中具有重要作用。