hTERT调控相关miRNA的鉴定及功能研究

国外及本所早期工作表明，hTERT活化导致端粒酶激活是肿瘤发生发展的重要环节,但目前hTERT调控机制仍不清楚。以往有关hTERT的调控研究多集中于转录水平,很少涉及转录后调控。miRNA是基因转录后调控的重要因素，目前仅发现miR-138参与了hTERT的转录后调控。靶基因的转录后调控一般多有数条miRNA参与，因此我们推测还有其它miRNA参与hTERT转录后调控。我们采用生物信息学技术预测出27条可能调控hTERT的miRNA，并采用miRNA芯片技术从中筛选出7条很可能参与调控hTERT的miRNA，初步证实除miR-138之外,miR-491也参与了hTERT转录后调控。本课题拟对其余可能调控hTERT的miRNA进行鉴定及进一步功能研究,在miRNA层面探讨hTERT转录后的调控机制,完善对肿瘤发生发展机理的认识,并为基于hTERT调控相关miRNA的肿瘤治疗提供理论依据。

我们首先采用生物信息学技术预测了57条hTERT调控相关的miRNA。采用miRNA基因芯片技术筛选预测结果，发现14条miRNA可能参与调控hTERT：miR-1266、miR-491-5p、miR-1234、miR-1323、miR-138、miR-299-3p、miR-668、miR-1266、miR-1182、miR-1207-5p、miR-637、miR-654-5p、miR-512-5p和miR-886-3p。采用real-time PCR进一步筛选到8条miRNA很可能对hTERT有着转录后的调控作用：miR-1266、miR-491-5p、miR-1323、miR-299-3p、miR-668、miR-1182、miR-1207-5p、miR-886-3p。其次，我们采用表达调控实验及双荧光素酶实验验证以上8条miRNA。表达调控实验发现，能够下调hTERT表达水平的除miR-138之外还有4条，分别是miR-1266、miR-491-5p、miR-1182、miR-1207-5p。双荧光素酶实验进一步发现miR-1207-5p和miR-1266能下调萤火虫荧光素酶的表达。结合两者结果，确定发现miR-1207-5p和miR-1266可通过结合于hTERT 3‘UTR而抑制hTERT表达。在临床胃癌标本中亦发现，miR-1207-5p和miR-1266在癌旁组织中的表达显著高于癌组织；进一步生存分析发现，术后胃癌组织内高表达miR-1266的患者，具有更佳的生存期。最后，我们对这2条miRNA进行了体外及裸鼠体内肿瘤抑制实验。结果表明， miR-1207-5p和miR-1266在体外及裸鼠体内均可不同程度地抑制SGC-7901细胞的增殖与侵袭能力。研究结果发现miR-1207-5p和miR-1266可在转录后抑制hTERT表达，完善了对hTERT调控机制的认识，并为基于hTERT调控相关miRNA的肿瘤治疗提供了理论依据。