保肺定喘汤对慢性阻塞性肺病中VEGF信号通路的影响

Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD)is a chronic disease in the respiratory system.Due to its complex mechanism,it is involving many links and valid targets,the mechanisms are still very weak.Bao Fei Ding chuan Tang decoction as a experience prescription of national traditional Chinese medicine doctor was used in clinical practice and had good results.This issue will estblish a rat model of COPD by smoking method and measure the airway remodeling and angiogenesis from VEGF-VEGFR-PIK3-AKt related signaling pathways.With the specific targeted interventions of the anti-VEGF monoclonal antibody and mTOR inhibitor, we conducive to revealing molecular mechanisms of airway remodeling in COPD. The intervention therapy of Bao Fei Ding chuan Tang decoction can show whether VEGF signaling pathway play a role in its mechanism of action.Our experiments can give a solid foundation to Bao Fei Ding chuan Tang decoction.We also want to develop Bao Fei Ding chuan Tang decoction as a new agent in future.

慢性阻塞性肺病是呼吸系统慢性病之一，因其机制复杂，涉及诸多环节，目前有效靶点和相关机制研究仍非常薄弱。保肺定喘汤作为国家级名中医的经验方在临床实际应用中具有良好的疗效。本课题通过烟熏法建立慢性阻塞性肺病大鼠模型，从VEGF-VEGFR-PIK3-AKt相关信号通路研究其在COPD肺血管重塑形成和发展中的作用机制。通过抗VEGF单克隆抗体和mTOR的抑制剂雷铂霉素特异性靶向干预，揭示COPD中肺血管新生和血管重塑的分子机制。中药保肺定喘汤干预治疗，其揭示是否通过VEGF相关的信号通路发挥作用，为进一步将其开发为一种院内制剂或中药新药奠定坚实的实验基础。

目的：通过抗VEGF单克隆抗体贝伐单抗和mTOR 的抑制剂雷帕霉素干预治疗，观察VEGF-VEGFR-PIK3-AKt相关信号通路在COPD肺血管重塑形成和发展中的关系，研究保肺定喘汤治疗慢性阻塞性肺疾病的作用机制。方法：通过气道内滴入脂多糖（LPS）加烟熏法建立COPD大鼠模型，将大鼠分为A组（正常组）、B组（COPD+NS组）、C组（COPD+贝伐单抗组）、D组（COPD+雷帕霉素组）、E组（COPD+保肺定喘汤组），每组12只。用药后检测大鼠肺功能；收集各组大鼠血清、肺泡灌洗液（BALF）、肺组织标本；取部分左侧肺组织行HE染色，观察各组大鼠细支气管、肌性动脉管壁厚度、面积；免疫组化观察各组大鼠肺组织中VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2的阳性表达及计算PU值；EL1SA法分别测定血清、BALF、肺组织中VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2水平。结果：肺功能示：与A组相比B组大鼠气道阻力明显增高，C、D、E组大鼠气道阻力较B组有所下降，E组效果略逊于C、D组，HE染色示：与A组相比B组大鼠，细支气管、肌性动脉管壁厚度、面积明显增加，C、D、E组大鼠细支气管、肌性动脉管壁厚度、面积有较B组有所下降，E组效果略逊于C、D组，免疫组化：与A组相比B组大鼠肺组织VEGF、VEGFR1、VEGFR2、mTOR表达明显增高，C、D、E组大鼠肺组织VEGF、VEGFR1、VEGFR2、mTOR表达较B组有所下降，E组效果略逊于C、D组，ELISA结果示：与A组相比B组大鼠血清、肺泡灌洗液、肺组织中VEGF、VEGFR1、VEGFR2、表达明显增高，C、D、E组表达较B组有所下降，E组效果略逊于C、D组。结论：保肺定喘汤能改善气道内滴入LPS刺激法及烟熏法复制COPD大鼠气道重塑，其机理可能与减少VEGF传导通路中的VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2、mTOR表达从而抑制血管新生相关。