氧化苦参碱下调HSP27抑制纤维化肺成纤维细胞迁移的机制研究

HSP27是促进细胞迁移的关键蛋白，介导纤维化肺组织成纤维细胞（LFB）异常增高的迁移活性。我们采用蛋白组学和western blot研究发现，氧化苦参碱（OM）明显下调LFB HSP27表达。这一作用是否与OM抑制LFB迁移有关，尚待探究。本课题拟分两个层面进行：第一：首先检测HSP27 mRNA的表达、HSF1定位及HSF1与HSE结合活性，然后检测HSP27蛋白表达、蛋白合成和降解变化，以从基因转录和蛋白表达水平阐明OM调控HSP27表达的作用机制。第二：通过基因转染上调HSP27表达，或通过RNAi抑制HSP27表达，观察OM作用后LFB迁移和actin聚合变化，并观察Rho/ROCK/MLC2信号通路关键分子变化，确认HSP27在介导OM抑制LFB迁移活性中的重要地位，以从全新的角度揭示OM治疗肺纤维化的分子机制，并将为肺纤维化治疗提供新的药物靶标。

成纤维细胞的迁移启动肺纤维化的发生，并促进肺纤维化的发展。干预成纤维细胞迁移运动是治疗肺纤维化的重要策略。HSP27是促进细胞迁移的关键蛋白。本课题组前期发现，氧化苦参碱（oxymatrine, OMT）对于肺纤维化模型动物具有良好治疗作用。蛋白组学研究结果表明，OMT明显下调肺成纤维细胞 HSP27表达，这一作用提示HSP27可能是OMT作用靶点，且OMT可能通过下调HSP27表达进一步抑制细胞迁移活性，为证实这一设想，本课题通过系列研究，得到如下结果：.OMT在基因和蛋白水平均抑制HSP27表达，其作用呈剂量依赖性。二维、三维迁移实验表明，OMT显著抑制肺成纤维细胞迁移，其作用早于抑制该细胞增殖。HSP27在肺成纤维细胞迁移运动中发挥重要作用，这种作用与调节细胞骨架actin聚合有关。改变HSP27表达明显影响OMT对肺成纤维细胞迁移运动的调节作用， OMT使actin聚合增强，但不影响Rho 、ROCK、MLC信号蛋白表达，提示HSP27可能在OMT的这一调节作用中是重要介导者，并通过HSP27影响细胞骨架进而抑制成纤维细胞迁移。.本课题从一个新的角度，从细胞、分子等层面进一步揭示了OMT治疗肺纤维化的分子机制，实验结果为OMT作为抗肺纤维化治疗药物的进一步研发，为HSP27作为新的肺纤维化治疗的药物靶标奠定了基础。