假单胞菌抗生素合成的遗传改造研究

每种抗生素的生物合成都有多种酶参与，其生物合成调控复杂多样。弄清抗生素生物合成调控的机制，有利于构建发酵产量高、产物纯的工程菌株。为此目的，本研究要建立连续、多靶点假单胞菌染色体基因修饰技术。将lambda噬菌体同源重组系统引入假单胞菌，使两端与染色体靶点同源序列只有35bp以上的DNA片段能够与假单胞菌染色体进行有效的同源重组。构建含有抗生素标记基因(bla)和蔗糖负选择基因(sacB)的双选择组件(Cassette)，经过两次同源重组修改染色体靶点基因，产生不含有影响后续同源重组操作的染色体修饰。利用这种技术，遗传修改假单胞菌吩嗪类抗生素合成途径，更换相应的启动子序列，探讨吩嗪类抗生素生物合成调控机理，为构建发酵产量高、产物纯的工程菌株提供技术手段和理论依据。