ATP结合盒转运蛋白A1排砷结构域筛选研究

我们前期研究中发现人类ATP结合盒转运子ABCA1在细胞抗砷性及砷排出过程中发挥重要功能。本研究将首先构建编码ABCA1细胞内外11个环基因片段缺失的中间缺失突变体克隆入真核表达载体，转染低表达ABCA1的HeLa细胞，通过检测细胞内砷的蓄积、MTT检测细胞对砷耐受性和流式细胞术检测细胞凋亡率，初步确认排砷的结构域；在初步确认的结构域中构建更短序列缺失的突变体重复上述实验，明确特异的排砷结构域；运用生物信息学将确认的排砷结构域与已知与ABCA1转运胆固醇功能结构域进行比较，再将确认的排砷突变体的表达载体转染THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞，检测转染后细胞胆固醇的流出，观察ABCA1排砷结构域缺失对胆固醇流出有无影响。从而进一步确认ABCA1特异的排砷结构域，为解决含砷化疗药物的耐药难题和地方性砷中毒的防治提供新的技术手段。