CRMP4基因表达调控及其早期预测前列腺癌微转移的研究

转移是前列腺癌 (PCa)患者死亡的主要原因。申请人首次发现并证实CRMP4是新的PCa转移抑制基因，其表达在转移性PCa中下调。进一步研究发现转移性PCa中CRMP4启动子区10个CpG位点甲基化率极高且去甲基化处理后其表达可重新上调，证实启动子甲基化是其表达下调的表观遗传学机制之一。同时初步研究表明检测CRMP4基因甲基化可早期预测PCa微转移。本项目拟构建CRMP4亚克隆启动子荧光素酶报告基因质粒，比较其甲基化前后转录活性的差异，明确特异性CpG位点甲基化对其表达的影响；采用ChIP技术明确与上述CpG位点结合的甲基化CpG结合蛋白并分析该区域组蛋白修饰的变化，探讨甲基化CpG结合蛋白与组蛋白修饰对CRMP4表达的调控，为早期防治PCa转移提供新的治疗靶点。同时进一步大样本检测CRMP4基因甲基化并结合随访，临床验证上述研究结果并为早期预测PCa微转移提供新的分子生物学诊断方法。

转移是前列腺癌 (PCa)患者死亡的主要原因。课题组首次发现并证实CRMP4是新的PCa转移抑制基因，其表达在转移性PCa中下调。进一步研究发现转移性PCa中CRMP4启动子区10个CpG位点甲基化率极高且去甲基化处理后其表达可重新上调，证实启动子甲基化是其表达下调的表观遗传学机制之一。同时初步研究表明检测CRMP4基因甲基化可早期预测PCa微转移。本研究成功构建CRMP4亚克隆启动子荧光素酶报告基因质粒，通过TEAL定点甲基化修饰后与对照组相比差异明显。成功筛选得到CRMP4特异性CpG位点甲基化对前列腺癌早期转移有预测作用。研究首先采用甲基化特异性PCR法(Methylation specific PCR, MSP)检测临床样本前列腺癌CRMP4启动子甲基化状况，再采用二代焦磷酸甲基化测序技术，得出CRMP4甲基化位点（-848、-841）存在甲基化现象，并取这两个甲基化位点的平均值≥15%，可预测前列腺癌早期淋巴结转移，及早期预测生化复发。同时进行了多中心样本检测及验证，进一步证实了CRMP4基因甲基化可早期预测PCa微转移。该课题系列研究成果已发表SCI论文两篇和一篇投稿中，同时获得国家发明专利一项，并以第二完成单位获得国家科学技术进步一等奖。