WFDC2的结构、功能及其在卵巢癌发生发展过程中的作用初探

WFDC2（HE4）是新批准的卵巢癌血清诊断标志物，其在多数类型的卵巢癌患者组织中同样高表达。WFDC2属WAP家族蛋白，具有2个典型的WAP结构域，据此推测其可能具有抗微生物活性和/或蛋白酶抑制活性；然而迄今为止，无论哪种生物活性均未得到实验数据的支持。通过同源建模，发现WFDC2的三维结构与一种功能未知的蛇毒蛋白具有30-50%的相似性，但其活性中心序列与任何已知功能的WAP蛋白均不相同。本研究一方面在毕赤酵母表达分泌型WFDC2的基础上，制备纯度满足要求的蛋白用于晶体结构分析、生物活性测定；另方面构建WFDC2高表达的人卵巢癌细胞株，借助串联亲和纯化技术寻找与WFDC2相互作用的蛋白质。通过结构、活性、相互作用蛋白等信息和数据的整合，探索WFDC2在卵巢癌发生发展过程中的潜在作用，从而为卵巢癌的诊断治疗提供切实的理论支持和新的线索。

本研究成功在毕赤酵母中表达并纯化了重组WFDC2-His-tag蛋白和重组WFDC2-Fc融合蛋白，此外我们还尝试了在哺乳动物细胞中表达WFDC2-Fc融合蛋白，这些工作为进行活性及功能研究奠定了良好基础；在此基础上，研究利用毕赤酵母表达的重组WFDC2，我们分别考察了WFDC2的抗菌活性和蛋白酶抑制活性。实验结果首次证实了WFDC2具有对金黄葡萄球菌和毕赤酵母的抗菌活性；同时WFDC2对多种蛋白酶，包括金属基质蛋白酶9、枯草蛋白酶、绿脓蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶等，均有一定抑制活性，虽然对不同蛋白酶的活抑制强度存在差异，但WFDC2广谱的蛋白酶抑制活性首次获得了实验数据的支持。此外，通过对WFDC2作为卵巢癌标志物与CA125的同一性的meta分析，结合文献报导，研究认为WFDC2与卵巢癌的进展关系密切，并有可能成为卵巢癌诊断和治疗的参考靶点。相关研究内容发表英文SCI文章1篇，英文meta分析文章1篇，中文核心文章1篇。