双重防龋功效的新型短肽的构建及其体外防龋作用研究

Dental caries is a common oral disease, and the prevention of caries has been the focus of attention of oral medical workers.8DSS is a function short peptide which has been synthetised based on the dentin phosphoprotein.Our previous studies have shown that 8DSS can not merely inhibit normal enamel demineralization but also can promote remineralization of early enamel caries. As a non-fluoride anti-caries agent has certain research prospect and application value.Decapeptide (KSL) is a synthetic antibacterial peptide which was screened out from the peptide library ,has strong antimicrobial activity,and has no resistance in the process.Decapeptides have been demonstrated to have the potential to prevent early plaque formation and prevent caries development.However,there has no studies about the peptide which has both promote the mineralization and the antibacterial effect double anticaries efficacy. So,we propose a scientific hypothesis: can coupling 8DSS and decapeptide to together to build a double anti caries efficacy short peptide which can promote the mineralization and the antibacterial effect ?For verifying the hypothesis, we will fusion the decapeptide to 8DSS, construct and synthesized a double anti caries efficacy short peptide.Then analysis the purity of the peptide, observation the stability of the peptide in saliva, and the biological safety .In vitro experiments were conducted to investigate the remineralization effect, and with the artificial mouth model, investigate the effect of the peptide on the main cariogenic bacteria in plaque biofilms and its mechanism.The whole project is expected to provide new experimental basis and research strategy for the prevention and treatment of dental caries in the future.

龋病是口腔常见病、多发病，龋病的防治一直是口腔医务工作者关注的焦点。8DSS是基于牙本质磷蛋白合成的一种功能短肽，我们前期研究已经表明8DSS不仅能够抑制正常牙釉质脱矿而且能够促进早期釉质龋再矿化，作为非氟的防龋制剂具有一定的研究前景和应用价值。十肽（KSL）是从多肽库中筛选出来的一种人工合成的新型抗菌肽，具有较强的抗微生物活性，在作用过程中不产生耐药性。十肽已经被证实具有预防早期菌斑形成和阻止龋病发展的潜能。 然而，以往并没有关于既具有促进矿化又具有抗菌作用的双重防龋功效的短肽的研究。本课题拟在前期研究工作基础上，将十肽融合到8DSS中，构建并合成一种具有双重防龋功效的新型短肽，分析该短肽纯度，观察该肽在唾液中的稳定性及其生物安全性，通过体外实验研究其再矿化功效，并借助人工口腔模型，深入探讨该肽对口腔主要致龋菌菌斑生物膜的影响及其作用机制，为龋病的临床防治提供新的研究策略。

龋病是口腔常见病、多发病，龋病的防治一直是口腔医务工作者关注的焦点。龋病的实质是牙菌斑内细菌酵解碳水化合物产生有机酸，引起牙体无机物脱矿，有机质崩解，最终导致龋损形成的慢性进行性疾病。目前，临床上常用防龋药如 氟化物、洗必泰等，在实际运用过程中的很多问题逐渐被人们所发现，例如氟中毒，氟牙症，致龋菌耐氟菌株的出现，口腔组织染色，粘膜糜烂、对味蕾的刺激等。因此，寻找一种安全有效的非氟的防龋制剂成为龋病防治领域的一大研究热点。8DSS是基于牙本质磷蛋白合成的一种功能短肽，我们前期研究已经表明8DSS不仅能够抑制正常牙釉质脱矿 而且能够促进早期釉质龋再矿化，作为非氟的防龋制剂具有一定的研究前景和应用价值。十肽 （KSL）是从多肽库中筛选出来的一种人工合成的新型抗菌肽，具有较强的抗微生物活性，在作用过程中不产生耐药性。十肽已经被证实具有预防早期菌斑形成和阻止龋病发展的潜能。然而，以往并没有关于既具有促进矿化又具有抗菌作用的双重防龋功效的短肽的研究。本课题基于以上研究情况，在体外通过化学合成方法将十肽融合到8DSS中，构建出新型短肽DK及KS，通过高效液相色谱及MS质谱对其纯度、分子质量进行分析，通过圆二色谱检测短肽的二级结构及其在不同溶剂中的稳定性，通过CCK-8法对其在口内的生物安全性进行检测，通过体外实验研究其再矿化功效，并对其抗菌功效进行探索。结果发现，在结构稳定性方面，DK及KS均具有较好β-折叠的二级结构，且KS二级结构较DK更稳定。在生物安全性方面，DK及KS在较低浓度（50μM以下）时，具有较好的生物安全性，随着浓度的增加，其生物安全性降低。在体外矿化防龋方面，DK及KS均能抑制牙釉质脱矿并促进早期釉质龋再矿化，具有一定的防龋功效。在抗菌作用方面，不论是DK还是KS，其MIC较大，需使用高浓度的多肽时才有一定程度的抗菌作用，较单独的十肽而言，其抗菌作用受限制。该研究合成的DK及KS短肽并不能完全充分的发挥双重防龋作用，其抗菌作用有限，因此，在今后的科研工作中应更积极地探寻具有双重防龋功效的药物，为龋病的防治提供策略。