烟酰胺磷酸核糖转移酶在膀胱癌中的标记作用及其分子机制研究

膀胱癌是泌尿系统常见肿瘤之一，较高的复发率、远处转移率严重威胁患者生存率，尿路改道常降低患者的生存质量。新近研究结果提示，肿瘤发生发展与肿瘤细胞逃避各种刺激诱导的细胞凋亡密切相关。烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)是一种新型免疫调节因子，在细胞凋亡调控中发挥着重要作用，其参与肿瘤发生发展可能是通过激活ERK 1/2、诱导VEGF和MMP 2/9表达或通过NF-κB信号通路发挥作用。课题组前期研究发现膀胱癌患者血浆Nampt浓度显著增高，癌组织中Nampt表达上调，提示其与膀胱癌发生发展密切相关。本研究拟从DNA遗传变异、mRNA和蛋白表达、蛋白亚细胞定位等角度，深入研究Nampt与膀胱癌发生发展的关系及分子机制、其作为膀胱癌标记物的可行性，并采用质粒转染、RNA干扰使靶基因高表达、失表达，研究其对膀胱癌细胞凋亡/存活的影响及其信号通路，探索干预Nampt表达调控抑制膀胱癌发生发展。

膀胱癌是泌尿系统最常见的肿瘤之一，发病率及死亡率均居泌尿系统肿瘤首位。烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）是一种新型免疫调节因子，在细胞凋亡调控中发挥着重要作用。本项目研究采用PCR-RFLP分析技术与方法，对Nampt基因SNP位点rs61330082、rs2505568及rs9034进行了群体遗传性研究，发现rs61330082的C等位基因增加膀胱癌发病风险，rs2505568的A等位基因降低膀胱癌发病风险；在共显性遗传模式下，rs61330082位点CC基因型携带者患膀胱癌风险增加，在显性遗传模式下，rs2505568位点AT基因型携带者患膀胱癌风险降低。SNP位点rs61330082纯合子增加吸烟者中膀胱癌的发病风险，同时增加膀胱癌的侵袭性，rs2505568杂合子携带者膀胱癌复发风险降低。SNP位点rs2505568为膀胱癌患者预后的独立影响因素，AT基因型携带者非侵袭性膀胱癌患者复发风险降低，rs9034位点CT基因型携带者侵袭性膀胱癌患者复发风险增加。ELISA结果发现膀胱癌组血浆Nampt表达水平明显高于对照组，且血浆Nampt高表达患者复发风险增加。DHPLC突变筛查发现新突变位点：L183V。成功构建了Nampt基因WT、MT及shRNA干扰质粒，分别转染膀胱癌细胞T24。转录组测序分析基因表达差异，采用qPCR及Western Blot予以验证分析。结果发现Nampt基因高表达T24细胞组中，以STAT3蛋白表达及其磷酸化水平和PTEN基因mRNA表达及其蛋白表达变化为主：STAT3蛋白表达及其磷酸化水平明显增高；PTEN基因mRNA表达水平增加，而其蛋白表达水平却明显降低。转染shRNA干扰质粒抑制Nampt基因表达后，以STAT1蛋白表达变化为主，其表达水平明显降低。L183V突变影响胰腺祖细胞分化与增殖因子（PPDPF）、极光激酶A相互作用蛋白1（AURKAIP1）和人核糖体蛋白S15（RPS15）等基因表达，提示该突变可能通过影响上述基因功能，进而导致一系列基因表达变化，从而参与膀胱癌的发生发展。本项目研究的顺利完成，表明Nampt基因L183V突变参与膀胱癌发生发展，Nampt与STAT、PTEN等信号通路密切相关，为Nampt基因功能的深入研究以及膀胱癌发生发展分子机制研究提供了新的思路与方向。