果寡糖影响罗非鱼肠道定植乳酸杆菌Lactobacillus sp.分子生态的研究

本项目通过PCR/变性梯度凝胶电泳(DGGE)、实时荧光定量PCR及荧光染色显微计数等技术来研究饲喂果寡糖对罗非鱼肠道定植乳酸杆菌分子生态的影响。我们已从潜在益生乳酸杆菌中通过rpoB PCR/DGGE鉴定出13株可在罗非鱼肠道定植，在此基础上，分析饲喂果寡糖选择性增殖罗非鱼肠道定植乳酸杆菌的株谱，确定其中的优势增殖株。进一步通过罗非鱼非特异性免疫力、免疫保护率及肠道定植菌群的适应演替与恢复重建规律的研究，评价饲喂优势增殖株及果寡糖对罗非鱼的生物学效应，了解优势增殖株在罗非鱼肠道的定植规律、生态学机制及益生机理，最终为罗非鱼饲用益生菌/合生素的研制奠定基础。

本项目通过PCR/变性梯度凝胶电泳(DGGE)、实时荧光定量PCR、高通量测序等技术来研究饲喂果寡糖对罗非鱼肠道定植乳酸杆菌分子生态的影响。我们首先以斑马鱼为模型，构建鱼类肠道定植乳酸杆菌分子生态的研究方法，即rpoB PCR/DGGE法，鉴定乳酸杆菌在斑马鱼肠道的定植能力，并以单株乳酸杆菌添加饲料饲喂斑马鱼研究菌株定植能力与抗病保护率的关系，结果显示斑马鱼肠道优势定植乳酸杆菌可表现更强的保护效应。然后，依此方法从潜在益生乳酸杆菌中鉴定出13株可在罗非鱼肠道定植菌株，通过分析饲喂果寡糖选择性增殖罗非鱼肠道定植乳酸杆菌的株谱，确定优势增殖株为短乳杆菌CGMCC 1.2028，鼠李糖乳杆菌CICC 6141，植物乳杆菌 JCM 1149及鼠李糖乳杆菌 20300。在此基础上，我们首次报道了饲料添加强定植乳酸杆菌(L. brevisCGMCC1.2028)和弱定植乳酸杆菌(L. acidophilus JCM1132)对罗非鱼生长、肠道微生物结构、免疫和抗病力影响的比较研究。结果显示强定植乳酸杆菌能获得更好的益生效益，尤其在提高免疫力和抗病力方面。以上结果表明定植能力强弱是益生菌选择的一个重要参考标准。进一步通过罗非鱼生长、肠道定植菌群的适应演替及免疫保护率的研究，评价饲喂三株优势增殖株及果寡糖对罗非鱼的生物学效应，结果显示：乳酸杆菌和果寡糖配伍在生长方面没有促进作用，能明显影响肠道菌群演替，对致病菌有明显的抵抗作用，其中植物乳杆菌JCM 1149与果寡糖配伍能获得最好的保护效应。本项目为罗非鱼饲用益生菌/合生素的研制奠定了基础。