以羊膜上皮细胞为基础的组织工程角膜内皮构建及其生物学功能的研究

本项目将在形态学、组织学、基因转录、细胞表型和功能蛋白表达等水平比较人羊膜上皮细胞与人角膜内皮细胞的异同。然后将人羊膜上皮细胞置于不同的培养基中进行培养，并采用慢病毒介导的基因转染方法导入特定转录因子，诱导羊膜上皮细胞向角膜内皮细胞表型的特异性分化。在此基础上，采用I型、IV型胶原，Matrigel以及纳米材料PLGA等为载体构建以羊膜上皮细胞为细胞来源的组织工程角膜内皮，移植于去角膜内皮的新西兰白兔及恒河猴角膜内表面，术后观察角膜厚度、透明度，羊膜上皮细胞离子泵功能，羊膜上皮细胞在角膜内表面的分化，增殖，凋亡以及移行情况，以探讨用羊膜上皮细胞取代角膜内皮细胞的可行性。本项目的实施将为目前非常困难的角膜内皮组织工程提供一种全新的解决方案，也为组织工程全角膜的构建提供一种有效的角膜内皮替代物。

一、摘要.本项目的目的在于以羊膜上皮细胞构建组织工程角膜内皮，并研究其生物学功能。我们在形态学、组织学、基因转录、细胞表型和功能相关蛋白表达等水平比较人羊膜上皮细胞与人角膜内皮细胞的异同，然后将分离获得的新鲜人羊膜上皮细胞在不同的培养基中进行培养，观察羊膜上皮细胞在体外培养条件下的分化与功能改变，在此基础上，构建以羊膜上皮细胞为主要成分的组织工程角膜内皮。.为了观察移植后的组织工程角膜内皮中羊膜上皮细胞的迁移以及转归，我们对羊膜上皮进行示踪，并将组织工程角膜内皮移植于兔角膜内表面，对照组为只刮除角膜内皮和后弹力层，术后观察兔角膜厚度、角膜透明度的维持情况，我们发现通过内皮移植兔角膜透明度及角膜厚度均较对照组好，示踪显示羊膜上皮细胞片在角膜内表面贴附良好。我们的研究显示：羊膜上皮细胞可用于构建组织工程角膜内皮。目前，兔移植实验已取得成功，在此基础上正在进行恒河猴的组织工程角膜内皮移植。我们的研究有望缓解角膜内皮供体缺乏状况，提供一种具有活性的组织工程角膜内皮材料。