SNPrs11614913影响pre-miRNA-196a成熟的机制研究

miRNA-196a是Hox家族的上游基因，在很多肿瘤中表达异常,可能发挥癌基因或抑癌基因的作用。关联研究发现在它前体区的一个SNP位点（rs11614913）与多种肿瘤如乳腺癌，肺癌，食管癌等都有关联性。因此它可能作为一个功能性位点而参与肿瘤的发生发展，但是它是如何影响肿瘤易感性的，其具体的机制还不是很清楚。有研究发现不同基因型表达载体pre-miRNA-196a的表达没有差异但是成熟miRNA-196a有差别，因此此SNP位点很可能是影响了pre-miRNA到成熟miRNA的过程。本研究拟采用RT-RCR，EMSA,Norehern Blot等实验技术研究SNP（rs11614913）对miRNA-196a成熟过程以及表达的影响。探讨此SNP位点参与肿瘤易感性的机制。本研究将有助于我们进一步理解肿瘤发生，高异质性的分子机制具有重要的理论意义。

单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms, SNPs）是DNA序列中单个核苷酸碱基的变异，是基因组中最常见的遗传变异。SNPs在基因组分布广泛，根据其在基因组中位置不同，分为基因间SNPs、基因编码区SNPs、调控区SNPs。本项目选择三种不同类型的SNPs位点，在中国汉族人群的食管癌样本中通过病例对照的关联分析找到相关联的位点，并对其阳性位点进行功能研究。（一）P53是迄今为止发现的最为重要的肿瘤抑制因子之一。而P53抑癌活性的产生，是以其作为转录因子调控众多下游靶基因为基础的。因此，这些P53结合区域的SNPs有望成为新的肿瘤发病风险标记。本研究发现位于P53靶基因BAX的SNP位点rs1009316以及靶基因CDKN1A的SNP位点rs762624、rs2395655与食管鳞癌显著相关。（二）位于编码区的SNPs可能影响蛋白的结构而导致肿瘤的易感性不同。SERPIN基因家族是一类丝氨酸蛋白酶抑制剂，它们可以通过改变蛋白结构而参与多种生物学过程。通过研究发现位于SERPINB5基因的外显子区的SNP rs2289519以及rs2289520与食管鳞癌显著相关，但是这两个SNPs位点不能影响蛋白的结构等。进一步研究发现SerpinB5在食管癌组织中的表达比正常组织显著降低。（三）miRNA基因通常是由RNA聚合酶II(polI)转录的，最初产物为pri-miRNA。pri-miRNA在Drosha作用下被处理成pre-miRNA。exportin 5将pre-miRNA输送到细胞质。随后，另一个酶Dicer将其剪切产生约为22个核苷酸长度的miRNA:miRNA*双链。成熟的miRNA通过碱基配对调控基因表达。那么位于miRNA前体区的SNP位点可能会影响miRNA的成熟过程而导致对疾病的易感性不同。我们研究发现位于miR-196a前体区的SNP位点rs11614913与食管鳞癌显著相关，并且不同的基因型miR-196a的表达不同。进一步研究发现另一类非编码RNA-lncRNA可以通过结合Lin28A蛋白参与miRNA的成熟过程。SNP的关联分析作为复杂疾病易感基因挖掘的常用方法之一，本项目通过基因不同区域的SNPs的研究，发现了6个与食管癌相关的SNPs位点，为食管癌的诊断提供了新的潜在靶点。