两种PRSV分离物混合侵染番木瓜及病症差异决定因子的研究

申请人从大田PRSV发病植株上克隆了两种PRSV cDNA全长序列，其侵染性克隆可分别致寄主产生不同病症：番木瓜叶片上病症分别为黄斑和畸形, 西葫芦叶片上病症分别为轻花叶和叶脉灰白色，根据病症将其分别归类为Ys和Vb株系，这两个株系普遍存在混合侵染番木瓜现象，给抗病育种造成困难。本项目模拟实际田间可能发病生态，于网室和田间同步或非同步混合接种这两个PRSV株系海南分离物(PRSV-HNYs和PRSV-HNVb)，通过对植株病症与基本生长反应分析，病毒感染动态监测，研究这种株系混合侵染在实际田间发病的反应与株系间的作用，为探索有效的PRSV防治新策略提供参考。PRSV-HNYs和PRSV-HNVb全基因组测序结果显示核苷酸全序列相似性达92.4%，拟通过互换它们基因组功能片段，构建不同嵌合重组病毒侵染性克隆，结合其在寄主上的致病表征差异，探究决定PRSV病症差异关键病毒基因序列及功能。

在前期从大田PRSV发病植株上克隆了两种引起番木瓜叶片不同病症PRSV cDNA全长序列【PRSV-HNYs（GenBank登录号：EF183499；病症：花叶，黄斑）和PRSV-HNVb（GenBank登录号：HQ424465；病症：叶畸形）】的基础上，本项目模拟实际田间可能发病生态，于网室和田间同步或非同步混合接种这两个PRSV株系海南分离物，通过对植株病症与基本生长反应分析、病毒感染动态监测，结果显示：PRSV-HNYs和PRSV-HNVb可以复合侵染番木瓜，混合感染提前并加重了番木瓜病症的出现，且PRSV-HNVb在同步或非同步混合接种中竞争优势大于PRSV-HNYs，感染后期病症均表现为叶畸形；先接种PRSV-HNYs，后接种PRSV-HNVb可以延迟PRSV-HNVb叶畸形病症的出现，反之则无明显延迟PRSV-HNYs病症的出现。通过互换它们基因组功能片段，构建了34对不同嵌合重组病毒侵染性克隆，结合其在寄主上的致病表征差异，确定了与PRSV-HNYs和PRSV-HNVb病症相关的关键氨基酸序列位于PRSV的P1基因编码的179-193Aa。本研究结果为PRSV病情监测和进一步阐明PRSV分子进化和病症形成机理提供理论依据。