基于CD8+T淋巴细胞亚群的变化探讨扶正化瘀方抗肝纤维化的免疫调节机制

CD8+T lymphocytes are known to induce hepatic stellate cells (HSC) activation to promote liver fibrosis. Our previous studies have found that liver fibrosis with the clinical efficacy of specific treatment of hepatitis B cirrhosis Fuzhenghuayu capsule after the patient's peripheral blood CD8+T lymphocytes in vitro co-culture can inhibit HSC activation and proliferation and promote their withered death. To study this interesting finding, that "Fuzhenghuayu side by regulating CD8 + T cell subsets and cytokine secretion changes, inhibit proliferation and activation of HSC and promote apoptosis of activated HSC play antifibrotic The role of "hypothesis. The project will clinical research, animal experiments and in vitro experiments combine to Fuzhenghuayu compound after intervention, observe mutual CD8+T, CD8+CD28+T and CD8+CD28-Tcells as well as between the co-culture between HSC effect, to test the hypothesis, revealing Fuzhenghuayu capsule antifibrotic part immunomodulatory mechanism. To innovation, "based on traditional Chinese medicine 'tune-state' treatment philosophy, explore Fuzhenghuayu side by regulating the immune status affect HSC antifibrotic mechanism of action" on. Find the entry point to further improve the clinical efficacy of the compound preparation Fuzhenghuayu treatment of liver fibrosis.

已知CD8+T淋巴细胞能诱导肝星状细胞（HSC）的活化从而促进肝纤维化。我们前期研究却发现，用临床抗肝纤维化疗效明确的扶正化瘀胶囊治疗乙肝肝硬化后，患者的外周血CD8+T淋巴细胞在体外能抑制共培养的HSC的活化和增殖并促进其凋亡。为研究此有趣的发现，提出“扶正化瘀方通过调节CD8+T细胞的亚群及其分泌的细胞因子发生改变，抑制HSC的增殖与活化，并促进活化HSC凋亡，发挥抗肝纤维化的作用”的假说。本项目将临床研究、动物实验和体外实验相结合，以扶正化瘀复方干预治疗后，观察CD8+T、CD8+CD28+T和CD8+CD28-T细胞间以及与共培养的HSC之间的相互作用，验证假说，揭示扶正化瘀胶囊抗肝纤维化的部分免疫调节机制，在“基于中医‘调态’的治疗理念，探讨扶正化瘀方通过调节机体免疫状态影响HSC抗肝纤维化的作用机制”上作出创新，进一步提高扶正化瘀复方制剂治疗肝纤维化的临床疗效找到切入点。

扶正化瘀胶囊是临床上抗肝纤维化的有效药物。我们前期研究发现，扶正化瘀胶囊可以提高肝硬化患者体内CD4+T和NK细胞的比例，而对CD8+T细胞比例影响不明显，但将这些患者的CD4+T 、CD8+T和NK在体外分别与人HSC细胞株LX-2共培养以后发现，经扶正化瘀胶囊治疗以后患者的CD8+T、NK细胞可显著抑制LX-2的增殖和活化，促进其凋亡。是什么原因导致了CD8+T细胞的效应发生了改变？带着这样的思考我们将临床研究、动物实验和体外实验相结合，以扶正化瘀复方干预治疗后，观察CD8+T、CD8+CD28+T和CD8+CD28-T细胞间以及与共培养的HSC之间的相互作用，在“基于中医”调态’的治疗理念探讨扶正化瘀方通过调节机体免疫状态影响HSC抗肝纤维化的作用机制”上作出创新，进一步提高扶正化瘀复方制剂治疗肝纤维化的临床疗效找到切入点。. 体内研究表明：1. 扶正化瘀复方治疗有效患者外周血CD4+T细胞、NK细胞及CD8+CD28+T细胞的比例上升和CD8+CD28-T细胞比例下降。2.扶正化瘀复方治疗有效患者肝组织内CD8+T表达明显减少，CD28+T表达显著增加。3. CD8+CD28+T细胞和CD8+CD28-T细胞分化的功能亚群细胞Tcm和TemRA差异显著（P<0.05）。体外研究表明：1.扶正化瘀治疗有效组的3种淋巴细胞均明显抑制了LX-2的增殖，并促进其凋亡；2.服用扶正化瘀复方两组患者的CD8+T细胞和CD8+CD28-T细胞明显抑制共培养LX-2的a-SMA mRNA表达（P<0.05）；3.CD8+CD28＋T细胞可抑制其Col.1 mRNA的表达（P<0.05）；4.FZHY有效组的CD8+T细胞及其亚群均可以抑制LX-2上-SMA 和Col.1蛋白的表达（P<0.01）；5.扶正化瘀复方促进LX-2表达Fas mRNA（P<0.01）；6.扶正化瘀复方促进LX-2分泌穿孔素、颗粒酶B（P<0.01）.. 本研究得出的结论是:扶正化瘀方通过调节CD8+T细胞的亚群（CD8+CD28+和CD8+CD28-）及其分泌的细胞因子发生改变，抑制HSC的增殖与活化，并促进活化HSC凋亡，发挥抗肝纤维化的作用.. 研究工作进展顺利，达到预期目标。已在国内核心期刊发表论文6篇，协助培养研究生3名。