基于阻断Wnt/β-catenin信号转导途径阻抑矽肺纤维化的实验研究

矽肺是我国尘肺职业病中危害最严重的一种疾病，占尘肺总病例接近50%，但目前其发病机制仍不十分清楚。最新研究表明，Wnt/β-catenin信号转导途径与肺纤维化的形成密切相关，在肺纤维化的发生发展中发挥重要的作用。本研究以该途径中最重要的效应分子β-catenin为目的基因，利用RNA干扰技术构建β-catenin shRNA表达的慢病毒载体，并在体外、体内进一步观察其阻抑矽肺纤维化发生发展的效果，为矽肺纤维化的分子机制研究提供科学依据，并为肺纤维化的临床治疗奠定实验基础。

应用RNA干扰技术结合慢病毒载体，成功构建小鼠β-catenin shRNA 表达的慢病毒载体Lv-shβ-catenin，并应用Real time-PCR和Western blot技术验证其具有干扰β-catenin表达作用。应用Real time-PCR和Western blot技术，体外实验研究证明Lv-shβ-catenin能够抑制MMP2和MMP9在小鼠肺上皮细胞和肺泡巨噬细胞中的表达。应用ELISA技术，证明Lv-shβ-catenin具有抑制小鼠肺巨噬细胞分泌TGF-β1、TNF-α和IL-6的作用。在小鼠矽肺动物模型体内给予Lv-shβ-catenin，发现其对肺组织中的β-catenin的表达具有明显抑制作用；通过测定肺组织中羟脯氨酸含量、病理观察（HE染色）和应用免疫组化方法测定肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量以及肺组织中MMP2和MMP9蛋白的表达情况，均证明Lv-shβ-catenin可抑制肺组织内MMP2和MMP9蛋白的表达，并抑制胶原蛋白的合成，具有阻抑肺纤维化发生发展的作用。本课题探明了Lv-shβ-catenin无论在体外和体内均可通过阻断Wnt/β-catenin信号转导,抑制下游蛋白MMP2和MMP9蛋白的表达，并能够进一步阻抑肺纤维化的发生发展，这为矽肺纤维化预防控制与临床治疗提供了理论依据。