AFP特异性CD8+T肝癌疫苗抑制肝癌细胞生长分子机制探究

Hepatocellular carcinoma (HCC) vaccines of AFP immunodominant peptides and Lenti-AFP-based are hot projects of HCC immunotherapy study. We used AFP immunodominants（AFP542）、strong and specific subdominants (AFP1)and lentivirally vectors transfected with AFP which restricted by HLA-A*0201 and prepared healthy donor AFP-specific HCC vaccines.Our previous studies demonstrated that the healthy donor AFP-specific HCC vaccines could efficiently inhibit HCC cells growth in vitro and in vivo and significantly increased the production of antitumor cytokines ,such as IL-2, IFN-γ、TNF-α、and effector molecules perforin and granzyme B while decreasing regulatory antitumor cytokine IL-10 level. Our pre-experiments raised the hypothesis that healthy donor AFP-specific CD8+T cells HCC vaccines inhibited HCC cells growth involving in the Perforin/Granzyme B pathway.This study will be further investigated to determine whether the anti-human CD134 Monoclonal antibody(McAb) and L929 cells transfected with bcl-2 、U937 cells transfected with antisense bcl-2 can block/promote the molecular mechanisms of Perforin/Granzyme B pathway individually,in order to recognize if the mechanism of Perforin/Granzyme B pathway play an important role in inhibiting HCC cells growth and verify the hypothesis，so as to provide evidence for HCC vaccines therapy in clinical trials.

AFP免疫决定簇肽及Lenti-AFP肝癌疫苗是当今肝癌免疫治疗研究的重要方向。我们曾应用HLA-A*0201限制性AFP免疫决定簇肽（AFP542）、优势亚免疫决定簇肽（AFP1）及Lenti-AFP特异性肝癌疫苗，在体内外有效抑制肝癌细胞生长并上调多种抗肿瘤细胞因子表达、下调负性细胞因子IL-10表达。前期预实验提出了健康人AFP特异性CD8+T肝癌疫苗对肝癌细胞杀伤作用与穿孔素/ 颗粒酶B通路机制有关的假设。本研究拟在预实验基础上，应用抗人CD134单抗及转染bcl-2基因的L929细胞、转染反义bcl-2基因的U937细胞在体外细胞水平阻断/或促进Ca2+依赖性穿孔素-颗粒酶B通路，以揭示健康人肝癌疫苗作用的分子机制并验证上述假设，为临床肝癌疫苗治疗提供理论基础。

AFP免疫决定簇肽及Lenti-AFP肝癌疫苗是当今肝癌免疫治疗研究的重要方向。我们曾应用HLA-A*0201限制性AFP免疫决定簇肽（AFP542）、优势亚免疫决定簇肽（AFP1）及Lenti-AFP特异性肝癌疫苗，在体内外有效抑制肝癌细胞生长并上调多种抗肿瘤细胞因子表达、下调负性细胞因子IL-10表达。前期预实验提出了健康人AFP特异性CD8+T肝癌疫苗对肝癌细胞杀伤作用与穿孔素/颗粒酶B通路机制有关的假设。本研究拟在预实验基础上，应用抗人CD134单抗及抗人CD28单抗体外细胞水平阻断/或促进Ca2+依赖性穿孔素-颗粒酶B通路，以揭示健康人肝癌疫苗作用的分子机制并验证上述假设，为临床肝癌疫苗治疗提供理论基础。我们采用经过AFP抗原决定簇肽（AFP542）刺激或转染AFP的慢病毒(Lenti-AFP)刺激的树突状细胞（AFP542/Lenti-AFP-DC），体外活化AFP特异性CD8+T细胞，并应用抗人CD134单克隆抗体体外封闭AFP-CD8+-CTL，发现AFP-CD8+-CTL体外杀伤HepG2细胞后IFN-γ、IL-2、穿孔素（Perforin）、颗粒酶B（Granzyme B）等细胞因子的释放量明显减少（P<0.01）,证实了穿孔素-颗粒酶B机制在肝癌疫苗对肝癌细胞杀伤过程中发挥了主要作用。随后我们应用抗人CD28单克隆抗体体外活化AFP-CD8+-CTL，发现AFP-CD8+-CTL体外杀伤HepG2细胞后IFN-γ、IL-2、穿孔素（Perforin）、颗粒酶B（Granzyme B）等细胞因子的释放量明显增加（P<0.01）,进一步证实了穿孔素-颗粒酶B机制在肝癌疫苗对肝癌细胞杀伤过程中发挥了主导作用。此外，我们发现约52.2%的临床肝癌患者血液中可以检测到循环性肝癌细胞，而循环性肝癌细胞被认为是肝癌术后复发或转移重要原因之一，因此我们首次提出了术后应用肝癌疫苗可以预防或降低肝癌术后复发或转移率的概念。