p65亚基介导冬凌草甲素通过ROS/NF-kB信号通路稳定RARalpha的机制研究

Using active small molecule compounds as probes to figure out important drug targets has become an effective strategy in modern medical research. Recently, we find that oridonin, a natural small compound, can quickly enhance the stability of retinoic acid receptor alpha (RARalpha) through ROS-activated NF-kB signal pathway. In addition, p65 subunit plays an important role in oridonin-induced RARalpha stability. Based on these preliminary discoveries, we try to identify the molecular target of oridonin using biotin-oridonin as the probe, explore potential relationship between p65 subunit and RARalpha stability, and verify the differentiation-inducing effect of oridonin in APL animal model. These studies will help to identify the target protein of oridonin, reveal the mechanism of its anti-leukemia effect, clarify the mechanisms of RARalpha balance, develop novel RARalpha protein stabilizer, and evaluate potential clinical value of RARalpha protein.

利用活性小分子化合物作为探针发现重要药物靶标已经成为现代医学研究的有效策略。我们发现天然化合物冬凌草甲素在急性早幼粒细胞白血病（APL）中可以通过ROS激活的NF-kB信号通路，快速增强维甲酸受体（RARalpha）的稳定性。在此过程中，p65亚基的核转位至关重要。本课题将以生物素-冬凌草甲素作为探针，挖掘冬凌草甲素的直接作用靶点，重点研究APL细胞内p65亚基与RARalpha蛋白稳定性之间的关系，并通过APL动物模型，从动物实验水平，验证冬凌草甲素稳定RARalpha蛋白、诱导APL分化的效应。此研究将为揭示冬凌草甲素的作用靶点，探索其抗白血病机制，阐明体内RARalpha平衡机理以及寻找新的RARalpha蛋白稳定剂提供重要依据，并且对于揭示RARalpha蛋白的潜在临床靶标价值具有重要意义。

小分子化合物冬凌草甲素可以作为RARα蛋白的稳定剂在APL中发挥抗白血病效应。本课题通过质谱分析、免疫荧光、免疫沉淀、细胞转染、基因敲除、基因过表达等技术方法，围绕体内RARα蛋白平衡的机理开展了初步研究。该研究项目首次在国内外发现影响RARα蛋白稳定性的去泛素蛋白酶7（USP7），通过实验证实USP7通过UBL域在体内外与RARα发生相互作用，从而稳定RARα的蛋白水平。此外，我们发现与其他多种恶性血液疾病相比，USP7在APL患者中表达较低，而USP7的低表达有一定预后意义。综合上述研究结果，本研究不仅为揭示生理情况下RARα蛋白的平衡机理提供新的依据，也为在病理情况下挖掘RARα蛋白的临床靶标价值提供了新的思路。项目资助发表SCI论文6篇，待发表2篇。