类风湿关节炎活化的APC促进Th17应答新机制的研究

类风湿关节炎(RA)是累及周身关节的慢性侵蚀性滑膜炎，尽管Th17细胞在病程中发挥重要作用，但滑膜炎诱导Th17应答及其分化条件未明。近期，"炎症中活化的单核细胞与记忆性T细胞直接接触可促进Th17应答"的研究（PNAS，2009），提示人体内存在不依赖细胞因子的Th17分化途径。我们的研究提示：①CD147分子参与免疫突触形成促进T细胞活化，其抗体抑制免疫突触形成，下调T细胞活化和增殖；②该抗体能抑制Th17分化；③CD147可激活STAT3的上游分子PI3K/AKT，ERK1/2。据此推测：细胞接触时的分子通讯促进记忆T细胞向Th17分化。本研究旨在明确RA炎症中活化的Mo-Mac促进Th17分化所需条件；确定CD147分子参与免疫突触和/或激活STAT3通路促进Th17分化的新机制；解析并确定CD147分子促进Th17分化及其抗原-抗体结合位点，提供抗炎新靶点。

类风湿关节炎（RA）一种是严重危害人类健康的慢性炎症性自身免疫病，其病理特征为累及周身关节的增殖性和侵蚀性滑膜炎。为了探讨RA炎症灶内活化的抗原提呈细胞（APC）促进Th17应答中机制，本研究1.采用免疫磁珠法分离纯化健康人或RA患者外周血CD14+单核细胞与CD4+CD45Ro+T细胞（记忆T细胞，Tm）共培养，成功建立了RA患者体内活化的APC促进Th17分化的研究体系，初步确定了RA活化APC促进Th17分化及影响因素，并通过抗体阻断、慢病毒载体法knock-down技术证明了CD147参与RA-APC诱导的Th17分化及其信号途径；2.在明确了CD147与T细胞活化密切相关的基础上，采用激光共聚焦显微镜、胶体金双标记免疫电镜、3D重建等技术建立了Jurkat T-Raji B细胞免疫突触及其信号转导研究体系，证明了CD147主要定位于免疫突触中的外周超分子活化簇区域，并与CD98在共定位，Jurkat T细胞表达的CD147在免疫突触形成中起重要作用。3.明确了CD147通过参与人巨噬细胞（MØ）和记忆T细胞（Tm）、DC和Tm的免疫突触形成，参与T细胞活化初始阶段第一信号的发生与转导。应用全磷酸化抗体4G10检测了T细胞活化后的酪氨酸磷酸化水平，发现，应用CD147单克隆抗体阻断后，酪氨酸磷酸化水平明显下降。经CBA和Luminex筛查和Western Blot鉴定显示：CD147抗体阻断后，Tm细胞p-ZAP70、p-ERK、p-c-jun等明显下调，提示这些分子可能是CD147的下游信号分子。4.成功解析了CD147-5A12抗原-抗体复合结构并进行功能研究。本研究明确了RA炎症中活化的APC促进Th17分化所需条件；确定了CD147分子通过参与免疫突触的形成，参与记忆T细胞再活化初始阶段第一信号的发生与转导；以及解析并确定了CD147促进Tm和Th17活化的抗原-抗体复合结构及其关键氨基酸，提供了CD147分子参与T细胞活化/Th17分化及其抗体和拮抗剂抑制活化的新靶点。本项目的圆满完成，已发表SCI论文17篇，期刊源论文5篇，申报国家发明专利2项，获2013年教育部技术发明一等奖，培养研究生12名。