天然产物白杨素提高顺铂抗肿瘤活性及p53调控机制研究

Cisplatin is widely used in the treatment of solid tumor, .while the major barriers limiting its applicaion and efficacy are toxicity and resistance.In this project, the combinative effects of chrysin and cisplatin are studied to find out whether cisplatin-induced anticancer activity can be potentiated by chrysin using methods in vivo and in vitro. We have determined that chrysin could sensitize the cell death-induced by cisplatin in cancer cells(Hep G2 and BGC-823). On the basis of present researches, we are going to focus on transcription factor p53 to observe the trendency of its expression and stability, and to anlyse the regulating rules of the up- and downstream proteins along p53 singnaling pathway,such as NF-κB，JNK ,apoptotic protein and MDM2, trying to explore the role of p53 in the cotreatment and the molecular point which chrysin acts on along the line of activation→translocation to nuclear→DNA binding→translation→expression. In this research, we endeavor to find out a approch to overcome the drug-resistance and low-sensitivation of cisplatin from a new perspective and pave the way for chrysin to be applied in the anticancer treatment.

顺铂虽广泛用于实体瘤的治疗，但毒副作用和耐药性严重影响其疗效。本研究拟用食品成分白杨素联合顺铂，在动物和体外细胞试验基础上，从整体、细胞、分子水平入手，观察白杨素能否促进顺铂介导的肿瘤细胞凋亡、提高顺铂的抗肿瘤活性；并在已有研究基础上以转录因子P53为切入点，在mRNA、蛋白质水平观察其表达水平和稳定性的变化趋势，沿p53信号通路观察其上游NF-κB、JNKs等调控蛋白、下游凋亡相关蛋白和MDM2等负调控因子的变化规律，进而阐述p53在白杨素提高顺铂对肿瘤细胞毒性、增强抗肿瘤活性中的作用及白杨素在p53从活化→入核→DNA结合→翻译→表达的整个转录调控过程中的可能的作用位点，为克服顺铂在肿瘤治疗中的耐药性和低敏感性问题提供新的思路，为白杨素在肿瘤防治中的应用提供更广泛的科学依据

顺铂是常用的肿瘤化疗物质虽广泛用于实体瘤的治疗，但毒副作用和耐药性严重影响其疗效。本研究在体外培养肿瘤细胞中观察到食品中天然成分白杨素联合顺铂能够有效促进肿瘤细胞死亡，从细胞、分子水平证实了白杨素联合顺铂促进的肿瘤细胞死亡是caspase依赖的细胞凋亡，并呈剂量效应关系和时间效应关系。在已有研究基础上以转录因子P53为切入点，在mRNA、蛋白质水平观察其表达水平和稳定性的变化趋势，发现p53的磷酸化水平在白杨素联合顺铂处理细胞时明显增加；沿p53信号通路观察下游凋亡相关蛋白和MDM2等负调控因子的变化规律，阐明p53在白杨素提高顺铂对肿瘤细胞毒性、增强抗肿瘤活性中作为转录因子抑制顺铂上调的凋亡抑制蛋白DR5和Bax的表达,引起外源和内源凋亡途径活化，发挥促凋亡作用。并在进一步对p53上游MAPKs调控蛋白的观察分析中发现：白杨素可以已通过ERK1/2活化促进的P53磷酸化稳定P53不被降解，发挥P53诱导肿瘤细胞凋亡的肿瘤抑制蛋白作用，提高顺铂对肿瘤细胞的细胞毒性。研究中还观察到白杨素与顺铂联合应用可以影响JNK和p38，改变前凋亡蛋白和凋亡抑制蛋白 Bcl-xl、FLIP和xIAP的表达，这些蛋白均为NFkB调控的下游凋亡相关蛋白，但其中意义还有待更深入的研究探讨。研究中也观察到白杨素对喜树碱也有促凋亡作用，逆转喜树碱耐药性。以上的体外研究为白杨素在肿瘤防治中的应用提供更广泛的科学依据。为顺铂喜树碱等常用抗肿瘤药物联合用药研究探索了一个可行性更好的方案。体内裸鼠试验也已顺利开展，观察到白杨素联合顺铂的抗肿瘤活性要比单独的顺铂更强，而且能有效缓解顺铂引起的毒副作用，但还需要增大样本量获得更确切的统计学支持。