EBV-miR-BART7靶向人宿主基因PTEN和AnxA1调控EMT促进鼻咽癌侵袭转移的研究

Our previous study initially found that EBV-miR-BART7 may be involved in EMT，invasion and metastasis of nasopharyngeal carcinoma by directly regulating human host`s PTEN and AnxA1 expression.To illustrate our findings, this project intends to firstly carry out the investigation of clinical samples by in situ hybridization, combined with clinical and pathological data, to explore the correlation between EBV-miR-BART7 and the invasion and metastasis of nasopharyngeal carcinoma. Moreover, in vitro and in vivo experiments will be used to validate the biological functions of EBV-miR-BART7 in nasopharyngeal carcinoma ( including invasion\metastasis, F-actin rearrangement and EMT).Then, Luciferase reporter analyses on nasopharyngeal carcinoma cell line, EBV-miR-BART7 overexpression and silencing experiments and correlation analysis in clinical samples will be appled to define that EBV-miR-BART7 can directly regulate PTEN and AnxA1 in nasopharyngeal carcinoma. Furthermore, this project continues to explore how EBV-miR-BART7 regulates PTEN, AnxA1`s downstream signals and thereby induces Actin rearrangement and EMT promoting the invasion and metastasis of nasopharyngeal carcinoma. Finally, the possible existence ot positive feedback regulation between EBV-miR-BART7 and PTEN/Akt is going to be explored. The project is expected to present a viral miRNA -mediated regulation mechanism of NPC invasion and metastasis.

前期发现 EBV-miR-BART7可能调控宿主基因PTEN和AnxA1表达，与鼻咽癌EMT和侵袭转移有关。为验证假说，本项目首先探讨EBV-miR-BART7在临床鼻咽癌侵袭转移中作用，同时过表达或沉默EBV-miR-BART7，从体内外实验证实其在鼻咽癌中生物学功能（EMT、侵袭转移）。然后，通过鼻咽癌细胞中Luciferase报告系统、EBV-miR-BART7表达或沉默后靶基因表达分析，结合临床标本验证，明确EBV-miR-BART7在鼻咽癌中确实靶向PTEN和AnxA1。最后，探讨EBV-miR-BART7通过PTEN、AnxA1影响下游信号诱导Actin重排和EMT并促进鼻咽癌侵袭转移的分子机制以及该机制在EBV（+）鼻咽癌细胞中所能发挥的作用，并阐明EBV-miR-BART7与PTEN/Akt间可能存在的反馈机制。据此提出EBV miRNA调控宿主基因促鼻咽癌侵袭转移新机制。

EB病毒感染与鼻咽癌关系密切。EB编码的miRNA是否能促进鼻咽癌恶性进展有待研究。本项目主要是探索和发现了EBV-miR-BART7 靶向人宿主基因 PTEN 调控 EMT 促进鼻咽癌侵袭转移的新的机制。1）从临床样本发现 EBV-miR-BART7 与鼻咽癌侵袭转移有关；2）体内外实验证实 EBV-miR-BART7 确实能促进鼻咽癌侵袭转移，并且能诱导EMT过程；3）发现 EBV-miR-BART7 在鼻咽癌中调控的主要靶基因是重要抑癌基因PTEN；4）并进一步发现 EBV-miR-BART7 能通过调控 PTEN影响下游几条重要的信号通路进而促鼻咽癌 EMT 和侵袭转移；5）最后，在EB病毒阳性鼻咽癌细胞中沉默内源性EBV-miR-BART7的表达，发现确实可以抑制EBV阳性鼻咽癌细胞的EMT和迁移。 .在此研究的基础上，我们还深入开展了相关的横向性研究，1）我们通过与其他课题组合作，对EBV-miRNA-BART7-3p进行了转化治疗方向的尝试，取得了可喜的实验结果；2）我们对其它病毒miRNA( 如EBV-miRNA-BART1) 进行类似规模的研究，也获得了重要的发现； 3）我们也对EBV病毒编码的蛋白（LPM1）通过促进宿主重要抑癌基因PTEN甲基化的机制进行了相关研究。 .因此，本项目按照国基委的要求完全甚至超额完成了课题研究任务。在基金的资助下，项目主持人在国内外首次揭示了EB病毒编码miRNA促进鼻咽癌EMT和转移的新机制，以通讯作者的身份发表SCI论文5篇，其中单篇最高IF为11.4，4篇IF>5.0，累计影响因子为36.2，并获发明专利1项，在国内外相关研究领域产生较大影响。