NIDO-αVβ3途径介导胰腺癌MUC4抗原特异性CTL凋亡的研究

黏蛋白家族成员MUC4是特异性胰腺癌相关抗原。在既往MUC4胰腺癌疫苗的研究中，我们发现在效靶细胞的共培养体系中，CTL的凋亡率与肿瘤细胞表面MUC4分子的表达强度呈正相关。在模拟研究分子之间相互作用和功能阻断预实验的基础上，我们提出"MUC4特有的NIDO结构域可能通过与CTL表面的αVβ3整合素受体结合而介导MUC4特异性CTL凋亡"的假说。本项目立足前期研究基础，拟利用建立MUC4特异性CTL克隆和固相研究模型、黏附/黏附抑制实验、免疫共沉淀、表达缺失突变基因、功能阻断等手段，从多个角度、用多种方法证明NIDO-αVβ3介导的胰腺癌MUC4抗原特异性CTL的凋亡途径，并阐明其分子机制，揭示一条新的胰腺癌细胞通过MUC4对特异性CTL杀伤作用的反击途径，为提高靶向MUC4胰腺癌疫苗的疗效打下基础。

黏蛋白家族成员MUC4是特异性胰腺癌相关分子。首先，我们从表型机制等多个角度深入研究了膜结合型的MUC4剪切体之一，MUC4/Y的功能与作用，证明其可以作为研究胰腺癌细胞中MUC4功能的模式分子，解决了“因为基因片段超长，无法过表达”而导致的MUC4分子及其特有结构域功能研究的瓶颈问题。在此基础上，我们首次发现MUC4/Y及其特有NIDO结构域的过表达，改变了胰腺癌细胞表面一系列粘附分子、细胞因子与细胞因子受体的转录与表达，影响了细胞间相互作用和肿瘤微环境。进一步， 我们通过比较NIDO结构域缺失前后的胰腺癌细胞的差异基因，在与细胞间作用和免疫调控直接相关的功能集群中，筛查到一批NIDO结构域功能相关的可能对T细胞起作用的分子，结合“NIDO与αVβ3之间没有显著的作用力”的实验结果分析发现原假说存在偏移，提示胰腺癌细胞通过MUC4分子对MUC4特异性CTL杀伤作用的反击途径机制不是单一途径而是复杂网络。在此基础上，本项目首先证明了MUC4/NIDO/THBS1-CD47凋亡信号途径，验证了MUC4分子及其特有结构域NIDO缺失前后对胰腺癌MUC4抗原特异性CTL功能的影响，为提高靶向MUC4胰腺癌疫苗的疗效打下基础。此外，本项目还探索了胰腺癌细胞诱导自然杀伤细胞NK凋亡和失能的部分作用机制，为提高通过激活免疫系统来对抗胰腺癌的免疫生物治疗的疗效打下基础。