三个藏药经典方早中晚组合给药协同治疗脑缺血机制探讨

Based on our preliminary results, compared to the individual administration group, the drugs combination group shows significant curative effects in the treatments of acute cerebral ischemia, hypoxia tolerance and anticoagulation. In this group, mice took the three Tibetan classical prescriptions in early, middle and late time-intervals. Therefore, in this study, several methods are used to illustrate the scientificity of drug administration and its principles. By comparing the different curative effects of individual and combination therapy with the classical compositions in Ershiwuwei shanhu Wan,Ruyizhenbao Wan,Ershiwei chengxian Wan, we explore the basis for the difference, the rationality of drug combination and how the related composition passed through the blood-brain barrier. Then illustrate connotations in the methods of Tibetan medicine delivery, accumulate experimental data for further study of systems biology and systems biology.

藏医学在心脑血管疾病防治方面有着独到用药方式，即采用三个以上成方组合在一日内按不同时段（早中晚）分别给药；我们初步研究发现，三种经方早中晚分别给药共同发挥作用确实比单独给药在改善小鼠急性脑缺血、耐缺氧和抗凝血方面药效显著，因此本研究拟采用系统体内药理学、血清药理学、血清药物化学、细胞生物学等方法，进一步确认早中晚组合给药的科学性，并阐明其给药原理。研究内容包括在现有化学有效成分和初步药理预实验研究基础上，通过对整体动物模型的药效学研究,比较藏经典成方二十五味珊瑚丸、如意珍宝丸、二十味沉香丸单用和不同时间组合给药对脑缺血的有效性差异；对血管内皮损伤的保护作用差异性。并结合体内、体外成分分析，探讨该有效性差异存在依据，探索组合给药方式存在的合理性；探求关键成分药效系统作用，探求方中相关成分对于透血脑屏障的作用，阐明藏药早中晚用药内涵，为下一步系统生物学和网络生物学研究提供实验积累。

课题组研究人员围绕本项目研究目标和拟解决的关键问题展开一系列相关试验，重点探讨了三种藏药经方一日之内按不同时辰组合用药与单独应用单方的药理作用差异；建立三种藏药早、中、晚组合用药及单独用药后，脑缺血模型大鼠体内外不同时间点的主成分色谱指纹图谱；着重研究方中共有药材入血化学成分不同时间点的血药浓度。. 结果发现，三个藏药经典方组合应用可通过减少梗死灶、减轻脑水肿、抑制氧化应激反应等对缺血脑组织产生一定保护作用，可以明显降低脑缺血复灌大鼠血浆粘度、压积、血沉、全血粘度，也显著降低全血相对粘度和红细胞聚集指数，显著升高红细胞电泳指数和变形指数，明显改善急性血瘀引起的微血管管腔狭窄现象。其机制可能通过下调凋亡促进因子Bax的表达，抑制CytC释放，下调Caspase-3，上调bcl-2蛋白表达，在线粒体途径所介导的细胞凋亡过程中发挥一定的脑保护作用。. 经过三个经典方给药后体内外对比分析发现，给药后血中共有成分为：芒果苷、鞣花酸、西红花苷II、甘草素、甘草次酸、木犀草素，其中其中鞣花酸、木犀草素、芒果苷、甘草素、西红花苷II能在三个经典方单独给药血中测出，推测，三方组合给药的目的是维持鞣花酸、木犀草素、芒果苷、甘草素、西红花苷II等成分的血药浓度，以保持疗效，从而从体内稳态血药浓度角度证实了组合按时辰给药的合理性。该项目研究中还建立了3种微量药效成分快速筛选模型。