Snpback Primer富集孕妇血浆中cffDNA及其在β地中海贫血无创性产前诊断中的研究

无创性产前诊断技术正得到越来越多研究者的关注，但目前尚无一种方法真正适于在临床开展实施。近期有研究者成功采用snpback primer富集肿瘤组织中的"rare allele"。本项目将探索snpback primer在无创性产前诊断领域的使用价值。本项目拟选用hemoglobin beta基因内3个SNPs作为孕妇血浆中游离胎儿DNA（cffDNA）提取及扩增的阳性对照，应用snpback primer富集孕妇血浆中胎儿特异性β地贫突变等位基因,再采用高分辨熔解曲线分析作基因分型，通过与传统介入性产前诊断结果相比较，以评估此方法的灵敏度和特异性，探索其在β地中海贫血无创性产前诊断中的应用价值。本项目将为无创性产前诊断技术的研究提供一个新的方向，为snpback primer应用于其他单基因遗传病的无创性产前诊断提供实验数据和理论依据。

无创产前筛查胎儿染色体非整倍体目前已广泛应用于临床实践，越来越多的研究者开始关注单基因遗传病的无创产前筛查。本项目旨在探索高分辨熔解曲线分析（high resolution melting analysis，HRM）技术在β地中海贫血无创产前筛查中的应用价值。本项目针对中国人群常见17种HBB基因突变设计引物，采用常规PCR结合HRM检测孕妇血浆中胎儿特异性父源突变；为进一步提高对孕妇血浆中胎儿特异性父源突变检测的灵敏度，我们还进一步改进采用等位基因特异性PCR和竞争性封闭探针富集孕妇血浆中父源突变，然后采用HRM做基因分型，通过与介入性产前诊断结果相比较评估检测方法的灵敏度和特异性。研究结果显示基于HRM技术的β地中海贫血无创产前筛查孕妇血浆中胎儿特异性父源突变的准确性为100%。本研究证实高分辨熔解曲线分析技术可用于β地贫的无创检测，该技术方法同样适用于其他单基因遗传病无创产前检测孕妇血浆中父源性突变。