树突状细胞疫苗诱导新生期中枢特异性免疫耐受防治哮喘的研究

哮喘是严重危害儿童身心健康的常见病，其病因和发病机制十分复杂。目前SIT的标准化变应原的临床疗效已被肯定，但其仍有很多急待解决的问题。因此，寻求适当的特异性免疫治疗已成为首要研究的问题。本课题采用基因修饰的方法使树突状细胞表达共刺激阻断分子细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融和蛋白（CTLA4Ig），增强其免疫耐受功能，制备树突状细胞疫苗，并选择在新生期T、B淋巴细胞尚处于发育的过程中这一特殊时期进行适当的干预与调节，诱导中枢免疫耐受，以解决目前临床上外周耐受所面临的困扰，并探讨免疫耐受的特异性（不同的抗原刺激，所接触的抗原致敏激发）及其终身性（选择了小鼠发育的三个不同阶段）。本课题从分子免疫学方面探索治疗哮喘的方法，为寻求过敏性疾病的治疗开拓了新的思路。

支气管哮喘目前主要以激素治疗为主，但激素只能对症，不能改变哮喘的自然进程，变应原特异性免疫治疗（SIT）是目前可能影响变态反应性疾病自然进程的唯一治疗方法。本项目以体外诱导培养的树突状细胞（Dentritic cell, DC）为载体，经特异性变应原刺激和免疫抑制基因CTAL4Ig修饰，构建了哮喘细胞疫苗。通过对小鼠哮喘模型的研究，探讨了CTAL4Ig基因修饰DC细胞疫苗治疗哮喘的可行性。结果表明，CTAL4Ig基因修饰的DC分泌IL-10相比未修饰的DC有显著提高。在体外混合淋巴细胞反应中，CTAL4Ig修饰DC相对未修饰组显著抑制了淋巴细胞增殖。通过免疫初生乳鼠，CTAL4Ig-DC疫苗能显著改善成年小鼠阶段，由卵清蛋白（OVA）致敏激发的哮喘症状。实验条件下，CTAL4Ig-DC细胞免疫组气道反应性显著优于对照组。肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞计数结果以及肺组织切片结果也证实了CTAL4Ig-DC细胞免疫对实验条件下哮喘症状的改善，显著降低IL-4和总IgE水平，提高IL-10含量，使得受试动物获得了对特定免疫原的免疫耐受。进一步，我们研究了CTAL4Ig-DC细胞疫苗的长效性和免疫原特异性。对比青年组（3月龄）和老年组（7月龄）小鼠在实验条件下，CTAL4Ig-DC细胞疫苗对OVA激发哮喘模型的作用。结果显示，与在青年组中的表现形同，老年组CTAL4Ig-DC细胞免疫组也具有OVA免疫耐受。气道反应性，嗜酸性粒细胞数量以及肺组织切片结果均显示CTAL4Ig-DC细胞免疫对哮喘有显著改善。证明初生乳鼠阶段获得的免疫耐受可长效保留在受试动物免疫系统中。而OVA刺激CTAL4Ig-DC（OVA-CTAL4Ig-DC）与尘螨（Derp）刺激CTAL4Ig-DC（Derp-CTAL4Ig-DC）在OVA哮喘模型和Derp哮喘模型的交叉试验结果显示，OVA-CTAL4Ig-DC疫苗所赋予模型小鼠的免疫耐受具有OVA特异性，不能改善由尘螨致敏激发的哮喘。而Derp-CTAL4Ig-DC疫苗能改善尘螨致敏激发的哮喘反应，但不能改善由OVA激发的哮喘。由此证明，CTAL4Ig-DC疫苗具有免疫原特异性。本课题从分子免疫学角度探索防治哮喘的方法，为耐受性DCs疫苗应用于哮喘的临床防治提供理论依据和应用指导，并为寻求其他过敏性疾病的防治开拓了新的思路，具有广泛的市场应用前景。