TIPE2-Rac-NLRP3信号网络在缺血性脑损伤中的作用及免疫调控机制

TIPE2 is an important negative immune regulator in cerebral ischemia reperfusion inflammation. Inhibition of NADPH oxidase activity can induce the expression of TIPE2. We do further study and found that in NOX2-/- knockout mice TIPE2 expression was significantly increased after cerebral ischemia reperfusion. So in this subject we will use OrbiTrap high precision mass spectrum method to find the regulation molecular in TIPE2 expression. NLRP3 is an important pattern recognition receptors in innate immunity and play an important role in the disease process.We found the expression of NLRP3 significantly increased in cerebral ischemia reperfusion.While the expression of NLRP3 decreased in TIPE2-/- knockout mice after cerebral ischemia reperfusion. The IL-1 β expression is also reduced. TIPE2 reduced the production of ROS through inhibition of Rac1 , and ROS play a key role in the activation of the NLRP3 inflammasome, suggesting that TIPE2 might play a protective role in cerebral ischemia reperfusion through inhibiting NLRP3 inflammasome. Therefore in this project we will verify that the TIPE2-Rac-NLRP3 signals pathway play an important role in cerebral ischemia reperfusion.

TIPE2是脑缺血再灌注炎症中重要的免疫负调控因子，抑制NADPH oxidase活性可增加TIPE2的表达，进一步研究发现NOX2-/-敲基因鼠，脑缺血再灌注后TIPE2的表达明显升高，因此本课题将用OrbiTrap高精度质谱方法找到调控TIPE2表达的转录因子，明确TIPE2表达调控的上游机制。NLRP3 炎症小体是固有免疫的重要组分在疾病发生过程中发挥重要作用，申请者发现脑缺血再灌注时NLRP3的表达明显升高，在TIPE2-/-敲基因鼠NLRP3的表达明显降低，IL-1β的表达也相应减少，结合TIPE2通过抑制Rac1减少ROS的产生，而ROS 在NLRP3 炎症小体的激活中起关键作用，提示TIPE2可能通过抑制NLRP3炎症小体在脑缺血再灌注中发挥保护作用，因此本课题将通过体内外实验从正反两方面研究TIPE2-Rac-NLRP3信号网络在缺血性脑血管疾病免疫调节中的作用和机制。

TIPE2是脑缺血再灌注炎症中重要的免疫负调控因子，NLRP3 炎症小体是固有免疫的重要组分在疾病发生过程中发挥重要作用，申请者发现脑缺血再灌注时NLRP3的表达明显升高，在TIPE2-/-敲基因鼠NLRP3的表达明显降低，IL-1β的表达也相应减少，TIPE2可能通过抑制NLRP3炎症小体在脑缺血再灌注中发挥保护作用，近年来研究发现，内质网应激在机体的炎症反应中发挥重要作用，课题进一步明确TIPE2通过调控ER Stress影响NLRP3参与到脑缺血再灌注炎症。因此本课题通过体内外实验深入研究TIPE2- ER Stress -NLRP3信号网络在缺血性脑血管疾病免疫调节中的作用和机制。同时对调控TIPE2表达的转录因子进行了探索，抑制NADPH oxidase活性可增加TIPE2的表达，进一步研究发现NOX2-/-敲基因鼠，脑缺血再灌注后TIPE2的表达明显升高，因此本课题将用OrbiTrap高精度质谱方法找到调控TIPE2表达的转录因子，明确TIPE2表达调控的上游机制。生物素标记的表达TIPE2启动子的序列作为探针，与从WT和NOX2-/-敲基因鼠MCAO动物模型脑组织提取的核蛋白相互作用，亲和纯化能够与其结合的转录因子。SDS-PAGE电泳分离，对其中差异表达的条带用OrbiTrap高精度质谱仪鉴定，结合软件预测NOX2调控TIPE2表达的转录因子。