基于新生大鼠脑瘫模型的六味地黄丸治疗"五迟"、"五软"证的作用机理及药效物质基础研究

Cerebral Palsy (CP) is brain injury due to various causes or movement disorders and abnormal posture due to developmental defects, which is one of the main diseases leading to disability. Our previous studies showed that 21 active components absorbed into blood after administered with LW have different degrees of controlling action to multiple biomarkers related with stunting syndrome in children, for the obvious negative role in free N- N-acetylneuraminic acid in urine after long-term administration. Presumably, LW should have multi targets, multi position advantage to CP, but the pharmacodynamic material basis and mechanism of LW in the treatment of CP remains unclear. Therefore, based on the newborn rat model of CP and cell ischemia and hypoxia model , the present study is undertaken to clear the pharmacodynamic material basis and mechanism of LW on "WuChi,WuRuan" of children by LC-MS/MS etc.

小儿脑性瘫痪(CP)是当前小儿致残的主要疾病之一。本团队前期研究发现，六味地黄丸(LW)体内21化合物对小儿发育迟缓综合症相关的多个生物标记物具有不同程度的调节作用，LW对CP具有潜在的预防和治疗价值，且具有多成分及多靶点协同增效的优势。但LW治疗CP的药效物质基础及作用机制仍然不清楚，限制了基于LW的治疗CP创新药物设计等深入开发研究。为此，本课题将以LW治疗小儿"五迟"、"五软"证的经典疗效为切入点，利用中医方证代谢组学方法，应用LC-MS/MS等技术，在新生大鼠脑性瘫痪模型上，确定LW治疗新生大鼠脑性瘫痪模型有效性的前提下，揭示LW体内成分与新生大鼠脑性瘫痪模型代谢生物标记物的相关性，同时将体内成分作用于神经细胞缺血缺氧模型，并进行细胞代谢组学分析，寻找交叉标记物群，追溯相关代谢酶、基因/蛋白信息，阐释药效物质基础及有效性的生化机制。

六味地黄丸（LW）由宋代钱乙取《金匮要略》中的肾气丸去桂附，变“温补肾阳”为“滋补肾阴”，在《小儿药证直诀》中首创用于治疗小儿先天肾阴不足所致的“五迟”、“五软”证，是中医“滋补肾阴”的经典代表名方。现代研究更多关注其“补肾”作用及相关应用，尤其是成年人疾病，诸如糖尿病，骨质疏松等，而忽视了六味地黄丸的经典疗效，没有很好地发挥其在治疗小儿发育迟缓方面的治疗价值。为此，以治疗小儿“五迟”、“五软”证的经典疗效为切入点研究六味地黄丸的治疗小儿脑性瘫痪及作用机制，使六味地黄丸回归经典疗效，并在此基础上阐明治疗“五迟”、“五软”证的相关药效物质基础，为研发治疗小儿“五迟”、“五软”证相关小儿疾病的现代组分中药“小儿六味地黄丸”奠定基础。.首先，本研究利用中医方证代谢组学的理论和方法，初步揭示LW的入血成分中6-O-甲基梓醇、莫诺苷、丹皮酚原苷、毛蕊花苷、獐牙菜苷脱水的代谢产物为干预HICP大鼠模型的潜在药效物质基础，为研制现代“小儿六味地黄丸”奠定基础。本研究佐证了中医方证代谢组学技术可以成为阐明中药药效物质基础的有力手段。其次，本研究在行为学、体重、脏器指数及股骨长度的基础上，应用UPLC-HDMS联用技术建立尿液/血液代谢组学研究方法，表征LW干预前后的尿液/血液代谢轮廓，确定了36个LW干预下的尿液差异代谢标记物及13个靶标代谢通路，圈定了8个代谢标记物作为LW影响大鼠生长发育的关键标记物。同时，确定了30个血液代谢标记物及12个相关的靶标代谢通路，圈定了8个代谢标记物作为LW影响大鼠生长发育的关键标记物。建立了具有动态特性的LW对新生大鼠生长发育影响的综合药效评价体系，具有一定的示范作用和重要科学意义。