CTGF疫苗抑制原发性肝癌：基于鸡胚移植瘤模型的研究

结缔组织生长因子（CTGF）在原发性肝癌（PHC）发生发展中起重要促进作用。本课题前期研究中发现，给主动免疫后产生抗CTGF抗体的小鼠腹腔种植鼠源性肿瘤细胞包括肝癌细胞，移植瘤形成受到抑制。为进一步验证CTGF疫苗对原发性肝癌的抑制效果及探讨其机制，本课题拟以CTGF及其片段的原核表达产物免疫母鸡，使母鸡产生并向鸡蛋卵黄转移高效价抗CTGF IgY；分离纯化抗CTGF IgY，观察其对培养的人肝癌细胞的影响；在此基础上，以卵黄中含有抗CTGF IgY的发育早中期鸡胚进行人源性肝癌细胞移植，通过观察移植瘤生长、转移情况评价CTGF疫苗抑制原发性肝癌的效果；通过研究鸡胚移植瘤细胞增殖、凋亡、血管发生、组织基质成分变化及移植瘤细胞基因表达谱改变明确CTGF疫苗抑制PHC的作用机制。旨在：(1)探讨以主动免疫方式阻断CTGF的作用治疗PHC的可行性；（2）建立一种新的细胞因子疫苗抗肿瘤研究模型。

本研究基于鸡胚移植瘤模型对结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）疫苗对原发性肝癌（primary hepatic carcinoma，PHC）的抑制作用进行了研究。内容和结果包括：（1）完成了CTGF全长、CTGF N端肽及CTGF C端肽的原核表达和纯化，以及偶联后重组蛋白免疫原性的验证；（2）完成了产卵洛曼鸡免疫，以及抗CTGF IgY分离，纯化和抗体活性验证；（3）为提高CTGF的免疫原性，降低杂抗体的产生，我们将CTGF（aa 138－159）及CTGF（aa 240－259）片段插入乙肝核心抗原（hepatitis B virus core protein，aa 1–149，HBcΔ）的c/e1 B细胞表位，构建了可以装配成病毒样颗粒（virus-like particles，VLPs）的HBcΔCTGF138-159与HBcΔCTGF240-259嵌合蛋白，利用嵌合蛋白装配成的VLP免疫产卵洛曼鸡，可以刺激机体产生高滴度的针对CTGF（aa 138－159）及CTGF（aa 240－259）的IgY，该抗体可以结合CTGF特定序列上的抗原决定簇，对中和CTGF活性具有更直接的作用；但是，利用鸡胚移植瘤模型验证CTGF主动免疫对PHC的抑制作用的研究中，我们发现，CTGF主动免疫对肝癌组织的生长及转移的抑制作用并不显著，根据已经完成的实验数据我们并不能证实CTGF主动免疫可以有效抑制PHC；（4）为验证鸡胚移植瘤模型可以作为一种新型的、适合于针对促肿瘤细胞因子主动免疫治疗恶性肿瘤研究的模型，我们选用HER2（aa 597－626）作为抗原，主动免疫产卵洛曼鸡（母鸡），刺激其产生针对HER2的多克隆抗体。母鸡产下的受精鸡胚接种人乳腺癌细胞悬液，制备鸡胚移植瘤模型。同时本课题在实施过程中还获得了不少有价值的结果以及一些值得进一步研究的新的发现，包括：（1）HBcΔCTGF138-159嵌合疫苗可以成功抑制四氯化碳诱导的小鼠的肝纤维化；（2）PDGF嵌合疫苗对肝癌发生发展具有显著的抑制作用。